色素細胞分化におけるWntシグナル関連因子とMITFとの機能的相互作用

Wnt信号相关因子与MITF在色素细胞分化中的功能相互作用

• 批准号: 12028202
• 负责人: 安元 研一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12028202/
• 关键词: tyrosinase; gene expression; microphthalmia; MITF; transcriptional regulation; TRP-2; LEF-1; Wnt

メラノサイト、網膜色素上皮細胞(RPE)の分化過程に機能する転写因子MITFの作用機構を明らかにする事を目的とし、特に発生や形態形成に重要なWntシグナルの伝達経路の因子とMITFとの機能的相互作用に注目して以下の解析を行った。1.MITFとLEF-1/β-Cateninによる転写調節機構の解析MITF-MがWntタンパクにより発現が誘導されることを見出し、Wntシグナル伝達因子LEF-1がMITF-Mプロモーターを制御している事を報告した。さらにMITFとLEF-1との協調作用によりメラノブラストマーカーであるTRP-2のプロモーター活性が上昇する事を見出した。この機構にはβ-Cateninの存在が必要であった。さらにPull Down Assay及び酵母、培養細胞でのTwo-Hybrid法により、MITFとLEF-1が相互作用する事を明らかにした。欠失変異体を用いた実験によりこの相互作用に必要な領域として、MITFのbasic-helix-loop-helix/leucine zipper(bHLH/LZ)領域と、LEF-1の核移行シグナル領域を同定した。2.MITF-A knock outマウスの作成とその表現型の解析Mitf-rwマウスはMitf遺伝子の1H及び1Bエキソンを含む領域を欠失しており、その結果RPEのメラニン色素形成に異常を来しているという報告がなされた。したがってRPEの分化と機能発現にはMitf-M以外のisoform(A、B、C、H)が機能している事が示唆される。この報告を踏まえてRPEの分化におけるMitf-Aの発現をさらに詳細に検討した。その結果RPEの分化に重要な機能を果たしていると思われる新規のisoformを見出した。さらにMITFとSOX10についてin situ hybridization法により発生過程における発現分布を解析して報告した。3.RPEにおけるMITFの新規標的遺伝子の探索RPEにおいてMITFの野生型と変異型を構成的に発現させた培養RPEを作成し、cDNAサブトラクション法によるMITFの標的遺伝子の単離を試みた。サブトラクション後のcDNAでは構成的に発現している遺伝子は除かれている事を確認し、発現量に差のあるcDNAクローンの単離を進めている。

In the process of differentiation of membrane pigment epithelial cells (RPE), the mechanism of differentiation of membrane pigment epithelial cells (RPE) can be used to analyze the effects of MITF factors on the purpose of events and the formation of physiognomy, which is important for the formation of pathways. The interaction between the pathway factor and the MITF mechanism is analyzed below. The 1.MITF LEF-1/ β-Catenin information system analysis of the MITF-M Wnt information system shows that the guidance is correct, and the Wnt response factor is LEF-1, MITF-M, which is responsible for controlling the reporting of the accident. The coordination between MITFs and Lef-1 is very important. There is a lot of trouble on the MITFs

项目成果

Shibahara,S. et al.: "Regulation of pigment cell-specific gene expression by MITF."Pigment Cell Research. 13(Suppl 8). 98-102 (2000)

柴原，S.

Amae,S. et al.: "Pigment cell-specific enhancer of the human tyrosinase-related protein 2 gene."Biochimica et Biophysica Acta. 1492(2-3). 505-508 (2000)

阿梅，S.

Watanabe.K. et al.: "Expression of the Sox10 gene during mouse inner ear development."Molecular Brain Research. 84(1-2). 141-145 (2000)

渡边.K.

Nakayama,M. et al.: "Repression of heme oxygenase-1 by hypoxia in vascular endothelial cells."Biochemical and Biophysical Research Communications. 271(3). 665-671 (2000)

中山，M.

Takeda,K. et al.: "Induction of melanocyte-specific microphthalmia-associated transcription factor by Wnt-3a."Journal of Biological Chemistry. 275(19). 14013-14016 (2000)

武田，K.