メラニン生成関連遺伝子の色素細胞特異的発現に関わる転写因子の解析

黑色素生成相关基因色素细胞特异性表达涉及的转录因子分析

基本信息

批准号：
07770076
负责人：
安元研一
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770076/
关键词：
tyrosinase gene expression microphthalmia MITF transcriptional regulation melanin DOPAchrome tautomerase TRP-2

项目摘要

研究の目的はメラニン生成関連酵素遺伝子の色素細胞特異的な転写の分子機構を解明することであり、当該年度に以下の研究を行い成果を報告している。1:メラニン生成関連酵素遺伝子の色素細胞特異的な転写機構の解析転写因子MITFの作用機構を調べる為に、大腸菌で発現させた組み換えMITFを用いて、メラニン合成系酵素遺伝子であるチロシナーゼ、TRP1、TRP2の各遺伝子上流領域に存在するCATGTGモチーフへの特異的な結合を明らかにした。更にこれらのCATGTGモチーフに変異を導入し、MITFによる転写活性化能の変化から、それぞれの配列の機能の違いを明らかにしている(投稿準備中)。また抗MITF抗体を作成しており、現在組織染色によって組織におけるMITFタンパク質の発現の状態を調べている。2:マウスメラニン生成関連遺伝子の発現におけるMITFの効果培養細胞にMITFを導入し発現させた後の転写活性化の比率を指標に、マウスチロシナーゼ遺伝子の色素細胞特異的な発現に必要な領域に存在する二つのCATGTGモチーフの機能の違いを明らかにした。さらにマウスTRP-1遺伝子の組織特異的な発現にも、プロモーターに存在するCATGTGモチーフが重要であることを明らかにし、報告した。3:MITF遺伝子の転写調節機構MITF遺伝子を単離し、色素細胞特異的な発現に働く転写開始点付近を中心とした領域の塩基配列を明らかにした。さらにMITF遺伝子の上流領域を用いてアッセイを行い、色素細胞特異的な発現に必要な調節領域をはじめて明らかにし、報告している。

该研究的目的是阐明黑色素相关酶基因的色素细胞特异性转录的分子机制，在本财政年度进行了以下研究并报告了结果。 1：分析黑色素生产相关酶基因的色素细胞特异性转录机制研究MITF（转录因子）的作用机理，我们使用了大肠杆菌中表达的重组MITF来阐明与catgtg基序的特异性结合，该基序与catgtg基序相结合。此外，已经将突变引入到这些CATGTG基序中，并且通过MITF激活转录的能力的变化（以准备发布）来揭示每个序列的功能差异。还会产生抗MITF抗体，目前正在通过组织染色研究组织中MITF蛋白的表达状态。 2：MITF对小鼠黑色素相关基因表达的影响，在将MITF引入并将MITF作为指标引入并表达MITF后的转录激活之比，我们阐明了两个CATGTG基序的功能差异，这些catGTG基序的功能差异是在小鼠酪蛋白酶基因的色素细胞特异性表达所需的区域所需的区域。此外，我们透露并报道了启动子中存在的CATGTG基序对于小鼠TRP-1基因的组织特异性表达很重要。 3：MITF基因的转录调节机制分离出MITF基因，并揭示了该区域的核苷酸序列围绕转录起点围起来充当色素细胞特异性表达。此外，使用MITF基因的上游区域进行测定，并首次揭示了染料细胞特异性表达所需的调节区域并报告。