血管平滑筋細胞の形質変換における血液凝固系・線溶系蛋白質の発現

血管平滑肌细胞转化中凝血和纤溶蛋白的表达

• 批准号: 11770122
• 负责人: 丸塚 浩助
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: 宮崎医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770122/
• 关键词: 血管平滑筋細胞; 形質変換; 血液凝固系; 線溶系; 動脈硬化症; 平滑筋細胞; 凝固系因子; 線溶系因子

急性冠状動脈症候群の発生ならびに動脈硬化病変の発生・進展おいて血栓形成が重要な役割を担っていることが知られている。この血栓形成は凝固系と線溶系とのバランスの破綻によって起きるが、血管の重要な構成成分である血管平滑筋細胞(SMC)に注目し、その関与を、特に、動脈硬化巣でみられる収縮型から合成型への形質変換と、凝固・線溶系因子の発現の差異について検討した。剖検例およびDCAにより得られるヒト大動脈・冠状動脈の各種段階の動脈硬化巣において免疫組織学的に検討し、また、培養ヒト血管平滑筋細胞における合成型から収縮型への分化誘導モデルを作成し、各種凝固・線溶系蛋白の発現の差異を検討した。1)ヒト剖検例およびDCAからの大動脈・冠状動脈サンプルにおける検討:死後3-6時間以内の剖検例およびDCAサンプルにおいて、各段階の動脈硬化巣病変を採取し、4%パラフォルムアルデヒド固定し、免疫組織学的検討に供した。免疫組織学的に細胞成分に富む動脈硬化巣におけるSMCはほとんどがSMemb陽性、SM2陰性で、収縮型から合成型へと形質変換しているものと思われたが、進行した動脈硬化病変ほど、細胞外基質に富み細胞成分はごく僅かであり、SMCの形質変換は、動脈硬化初期病変においての大きく関与するものと思われた。凝固系の開始因子である組織因子(TF)およびその阻害因子である外因系経路阻害因子(TFPI)は、細胞・細胞外基質ともに発現が認められ、動脈硬化病変の進展に伴い、発現強度が増加する傾向にあった。さらに、線溶系因子であるウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベータ(uPA)およびその阻害因子であるプラスミノーゲンアクチベーター1(PAI-1)も発現していたが、一定の差異を見いだせなかった。凝固系・線溶系とも、しかも促進因子・抑制因子とも同程度に発現しており、その量的差異が問題となるが組織学的検索範囲では確立し得なかった。2)培養SMCの分化による凝固系・線溶系因子の発現の検討:昨年までに確立した培養系により得られた収縮型分化誘導SMCと従来の増殖(合成)型SMCにおいて、蛍光免疫染色および細胞抽出液を用いたウエスタンブロットでは形質変換の指標であるアクチン・カルポニン・カルデスモンの発現は有意な差異を認めなかったが、ミオシン重鎖のSMembでは未知のsubfractionの発現の差異を認め、継代SMCにおいても分化の差があることが推察された。培養上清・細胞抽出液を用いてTF・TFPI・uPA・PAI-1の発現をウエスタンブロット法にて検討したところ、分化誘導SMCに比して再増殖させたSMCにおいて、培養上清中での有意なTFPI・PAI-1の増加を認め、また、細胞中のTFの増加、uPAの減少を認めた。以上より、元来血管には血栓抑制系があるので動脈硬化巣進展に伴い、血栓形成の促進系が早期より蓄積性に増加し、血栓形成・動脈硬化進展が左右される可能性が示唆された

The development of acute coronary syndrome and the progression of atherosclerosis are important aspects of thrombosis. This paper discusses the differences in the development of coagulation system, linear dissolution system, vascular smooth muscle cells (SMC) and other important components of blood vessels. To investigate the differences in the expression of various coagulation and lineolysin proteins in various stages of atherosclerosis in coronary arteries and arteries by immunohistochemical analysis, synthesis, contraction and differentiation induction in cultured vascular smooth muscle cells. 1) Analysis of coronary artery disease within 3-6 hours after death: Analysis of coronary artery disease within 3-6 hours after death, detection of atherosclerotic disease at various stages, 4% of coronary artery disease fixation, and immunohistochemical analysis. Immunohistologically, SMemb-positive SMC, SM2-negative SMC, contractile SMC, synthetic SMC, and qualitative SMC are rich in cellular components of atherosclerosis, progressive atherosclerosis, extracellular matrix rich in cellular components, SMC, and early atherosclerosis. Coagulation initiation factor, tissue factor (TF) and inhibitor factor, extrinsic pathway inhibitor factor (TFPI), cell extracellular matrix, and development of atherosclerosis are associated with a tendency to increase the intensity of development. In addition, the linear dissolution system factor Coagulation system, linear dissolution system, promotion factor, inhibition factor, different degree of occurrence, quantitative difference, histological model, and establishment. 2)A study of the development of coagulation and cytokinesis factors during differentiation of cultured SMC: In the established culture lines, the differentiation of contractile SMC was induced, and the differentiation of proliferative (synthetic) SMC was induced. Immunostaining and cell extracts were used to detect the differentiation of SMC. The expression of TF, TFPI, uPA, PAI-1 in culture supernatant and cell extract was studied by using the method of cell culture, differentiation induction of SMC was compared with proliferation of SMC, intentional increase of TFPI, PAI-1 in culture supernatant was recognized, TF increase in cells and uPA decrease were recognized. The above results indicate that the inhibition system of thrombosis in primary blood vessels is associated with the progression of atherosclerosis, and the promotion system of thrombosis is associated with the early accumulation of thrombosis and the progression of atherosclerosis.

项目成果

Sakamoto,T.,Marutsuka,K.,et al.: "TNF-alpha and insulm,alone and synergistically,induce plasminogen activator inhibitor-1 in adipocytes."American journal of Physiology. 276(6Pt.1). C1391-C1397 (1999)

Sakamoto,T.,Marutsuka,K.,et al.：“TNF-α 和胰岛素，单独或协同作用，诱导脂肪细胞中的纤溶酶原激活剂抑制剂-1。”美国生理学杂志。

Atsuchi,N.,Marutsuka,K., et al: "Combination of a brief irrigation with TFPI and Adenovirus-mediated local TFPI gene transfer additively reduces neointimal formation in balloon-injured rabbit carotid arteries"Circulation. 103. 570-575 (2001)

Atsuchi,N.、Marutsuka,K. 等人：“结合使用 TFPI 进行短暂冲洗和腺病毒介导的局部 TFPI 基因转移可进一步减少球囊损伤的兔颈动脉中的新内膜形成”循环。

Kisanuki,A.,Marutsuka,K., et al.: "Coronary Atherosclerosis in Youth in Kyushu Island, Japan : Histological Findings and Stenosis."Journal of Atherosclerosis and Thrombosis. 6. 55-59 (2000)

Kisanuki,A.、Marutsuka,K. 等人：“日本九州岛青年冠状动脉粥样硬化：组织学发现和狭窄。”动脉粥样硬化和血栓形成杂志。

Sato,Y.,Marutsuka,K.,et al.: "Overexpression of tissue factor pathway inhibitor in aortic smooth muscle cells inhbits cell migration induced by tissue factor/factor VIIa complex."Thrombosis Research. 94. 401-406 (1999)

Sato, Y., Marutsuka, K., et al.：“主动脉平滑肌细胞中组织因子途径抑制剂的过度表达抑制组织因子/因子 VIIa 复合物诱导的细胞迁移。”血栓形成研究。