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抗癌剤の作用におけるASK1の関与

ASK1 参与抗癌药物的作用

基本信息

批准号：
11770584
负责人：
杉本耕一
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770584/
关键词：
ASK1 抗癌剤アポトーシスネクローシス EGFP ASK-1

项目摘要

リンパ性白血病細胞株のJurkatに、いずれもC末端側にEGFPを付けた野生型およびdominant negativeに働く変異型ASK1を発現させるexpression vectorを導入し安定発現株を得たところ、変異型ASK1発現株の一つに抗癌剤に対して著しく抵抗性のものが得られた。ただし、EGFPを指標としflow cytometryを用いて変異型ASK1蛋白質の発現量を検討したところ他の安定発現株と比べてその量は多くはなかった。抗癌剤抵抗性Jurkatは、doxorubicin、vincristine、AraC等、作用機序の異なる種々の抗癌剤およびH_2O_2処理によってアポトーシスを起こす細胞の割合が親株の10分の1以下であった。また、抗癌剤抵抗性Jurkatは極めてアポトーシスを起こしにくいが、種々のストレスに対する細胞周期の変化はほとんど親株と同様であることが、細胞周期の分布をPI染色、アポトーシスをTUNEL法で検出する2次元のflow cytometryにより明らかとなった。従って、細胞周期停止とアポトーシスは異なる経路で制御されていて、変異型ASK1が後者の経路のみを抑制することが示唆された。低濃度の抗癌剤を60-72時間という比較的長期間作用させることによって細胞周期の停止が起こるが、アポトーシスは惹起されず、細胞は次第にネクローシスを起こした。抗癌剤抵抗株ではこの様なネクローシスも起こりにくく変化しており、アポトーシスとネクローシスが一部の経路を共有していることが予想された。

The expression vector for EGFP on the C-terminal side of the leukemic cell line was introduced into the expression vector for expression of ASK1 in the wild-type and dominant-negative cell lines, and the expression vector for expression of ASK1 in the stable cell line was introduced into the expression vector for expression of ASK1 in the resistant cell line. The amount of ASK1 protein produced in the presence of EGFP was determined by flow cytometry. Anti-cancer agents such as doxorubicin, vincristine, AraC, etc., have different mechanisms of action. The number of parental strains isolated from cells is less than 1 in 10. The cell cycle distribution was detected by PI staining and TUNEL method. The cell cycle distribution was detected by two-dimensional flow cytometry. Cell cycle arrest, cell cycle arrest, cell cycle Low concentrations of anticancer agents 60-72 hours later than the long-term effects of cell cycle arrest, drug response, cell cycle response The anti-cancer resistance strain is a part of the whole process.