肝細胞増殖因子の舌癌増殖抑制におけるシグナル伝達系の解析

肝细胞生长因子抑制舌癌生长的信号转导系统分析

• 批准号: 11771142
• 负责人: 大西 智和
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771142/
• 关键词: p21^<waf1>; Stat1; HGF

申請者らは、p21^<waf1>の発現上昇、及び転写因子であるStat1の活性化が、HGFの腫瘍細胞抑制効果と関連のあることを見出している。そこで本研究では、株化舌癌細胞を用い、Stat1とp21^<waf1>の関連性を明らかにすることを目的とした。まず、株化舌癌細胞を用意し、p53のhot spotであるDNA binding siteをRT-PCR法で増幅した後、その部位の塩基配列を確かめた。p53が変異を起こしている舌癌細胞にHGF刺激後、MTTassayにて増殖能を測定し、HGFによる増殖抑制が一番高い細胞を選んだ。選ばれた舌癌細胞にHGFを刺激し、時間を追って核抽出液を得、Stat1が結合するDNAコンセンサス配列をもとにoligonucleotideを合成し、[^<32>P]によってラベルされたoligonucleotideを用いゲルシフトアッセイを行った。その結果、3時間後にピークが認められた。コントロール実験としてはインターフェロン-γによるStat1の活性化を確認した。また、抗Stat1抗体を用いたsupershiftを行った結果、認められたbandがStat1とoligonucleotide複合体であることを確認した。HGF刺激し、細胞内抽出液を抗Stat1抗体で免疫沈降後、SDS-PAGEを行い抗リン酸化Stat1抗体を用いたWesternblotを行った。HGFによるStat1のリン酸化は2時間後にピークを迎えることが判明した。以上の実験の時間的経過から、リン酸化され活性化されたStat1がP21^<waf1>のプロモーター部位のStat1結合領域に作用し、p21^<waf1>の発現が上昇することにより、舌癌細胞におけるHGFの腫瘍増殖抑制効果が起こることが判明した。

Applicants ら は, p21 ^ < waf1 > の 発 is rising, and び planning write factor で あ る Stat1 の activeness が, HGF の swollen sores cells inhibit unseen fruit と masato even の あ る こ と を shows し て い る. そ こ で this study で は, strains of tongue cancer cells を い, Stat1 と p21 ^ < waf1 > の masato even sex を Ming ら か に す る こ と を purpose と し た. ま ず purpose, strains of tongue cancer cells を し, p53 の hot spot で あ る DNA binding site を で rt-pcr method raised し picture after た, そ の parts の salt base with column を か indeed め た. P53 が - different を up こ し て い る tongue cancer cells に HGF stimulation, MTTassay に て good colonization ability to measure を し, HGF に よ る raised colonization inhibit が を choose a high い cells ん だ. Choose ば れ た tongue cancer cells に HGF を を stimulation し, time chasing っ て nuclear extract を, Stat1 が combining す る DNA コ ン セ ン サ ス match column を も と に oligonucleotide を synthetic し, [^ < > 32 P] に よ っ て ラ ベ ル さ れ た oligonucleotide を with い ゲ ル シ フ ト ア ッ セ イ Youdaoplaceholder0 lines った. Youdaoplaceholder0 そ result, 3 time later にピ にピ が が が confirm められた. コ ン ト ロ ー ル be 験 と し て は イ ン タ ー フ ェ ロ ン - gamma に よ る Stat1 の activeness を confirm し た. を ま た, resisting Stat1 antibody with い た supershift を line っ た results, identify め ら れ た band が Stat1 と oligonucleotide complex で あ る こ と を confirm し た. After the stimulation of HGF to <s:1>, the intracellular extract を anti-STAT1 antibody で immunosedimentation, SDS-PAGEを performed <s:1> anti-リ <s:1> acidification of Stat1 antibody を, and <s:1> たWesternblotを performed った. After HGFによるStat1 <s:1> リ <s:1> acidification <s:1> for 2 time にピ にピ <s:1> を を followed by える とが とが とが to determine the た. Above の be 験 の time of 経 か ら, リ ン acidification さ れ activeness さ れ た Stat1 が P21 ^ < waf1 > の プ ロ モ ー タ ー parts の Stat1 combining domain に し, P21 ^ < waf1 > の 発 now rising が す る こ と に よ り, tongue cancer cells に お け る HGF の swollen sores raised colonization inhibitory unseen fruit が こ る こ と が.at し Youdaoplaceholder0.

项目成果

T.Ohnishi: "Prostaglandin E2 predominantly induces production of hepalocyte Growth factor/scatter factor in human dental pulp in acute inflammation."Journal of Dental Research. 79. 748-755 (2000)

T.Ohnishi：“在急性炎症中，前列腺素 E2 主要诱导人牙髓中肝细胞生长因子/散射因子的产生。”《牙科研究杂志》。

N.Arakaki: "Involvement of oxidative stress in tumor cytotoxic activity of hepatocyte growth factor/scatter factor."Journal of Biological Chemistry. 274. 13541-13546 (1999)

N.Arakaki：“氧化应激参与肝细胞生长因子/分散因子的肿瘤细胞毒活性。”生物化学杂志。