NoD/SCIDマウスを用いたヒト造血幹細胞の体外増幅法の研究

NoD/SCID小鼠体外扩增人类造血干细胞的研究

• 批准号: 12770409
• 负责人: 植田 高弘
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770409/
• 关键词: NOD; SCIDマウス; 造血幹細胞; 遺伝子導入; 骨髄; 臍帯血; レトロウィルス; 骨髄移植

平成12年度に私は、ヒト造血細胞を免疫不全(NOD/SCID)マウス骨髄に再構築するin vivoアッセイ系を確立し、骨髄再構築能を持つヒト造血幹細胞の測定を可能とした。さらにこのアッセイ系を用いて、ヒト造血幹細胞(SRC:scid repopulating cell)の体外増幅法を検討したところ、SCF+FL+TPO+IL-6/sIL-6Rのサイトカインの組み合わせで、ヒト造血細胞の平均生着率は培養前の細胞を移植したものに比べて約10倍も高く、SRCも4.2倍と著明に増幅されていることが証明された。この実験系を用いて、私が作成した、Green fluorecence protein(GFP)を選択マーカーに組み込んだレトロウイルスベクターを用いて、増幅した造血幹細胞に対し遺伝子導入し、NOD/SCIDマウス内での長期造血再構築能を有する造血幹細胞に対する遺伝子導入効率を検討を試みた。まず遺伝子導入する造血幹細胞のソースとして、骨髄と臍帯血のCD34陽性細胞について、その中に含まれる造血幹細胞の性状を比較検討した。骨髄再構築能は臍帯血のCD34陽性細胞の方が遥かに優れていることが確認され、遺伝子導入実験のソースとしては臍帯血のCD34陽性細胞を用いて行うこととした。現在上記のサイトカインの組み合わせで臍帯血CD34陽性細胞に遺伝子導入をしているが非常に高率にCD34陽性細胞にGFP遺伝子導入が可能であり、そこから形成されるコロニー細胞にも高率にGFP遺伝子が導入されていることが確認できた。現在NOD/SCIDマウスに移植して生着細胞中のGFPの割合を各臓器で検討中である。

は pp.47-53 12 に private ヒ ト hematopoietic cells を immune insufficiency (NOD/SCID) マ ウ ス bone marrow に to construct す る in vivo ア ッ セ イ を established し, bone marrow, can build を again hold つ ヒ ト determination of hematopoietic stem cell の を may と し た. Youdaoplaceholder0 アッセ アッセ is a line of を using て て and ヒト hematopoietic stem cells (SRC:scid repopulating Cell) の rights amplitude method in vitro を beg し 検 た と こ ろ, SCF + FL + TPO + IL - 6 / sIL - r の サ イ ト カ イ ン の group み close わ せ で, ヒ の ト hematopoietic cells with average rate は を culture former の cells transplantation し た も の に than べ て about 10 times higher も く, SRC も と zhao Ming に raised 4.2 times of さ れ て い る こ と が prove さ Youdaoplaceholder0. The を practical laboratory uses the を て and the private が to make the た and Green fluorecence Protein (GFP) を sentaku マ ー カ ー に group み 込 ん だ レ ト ロ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を with い て, rights of し た hematopoietic stem cells に し seaborne heritage 伝 import し, NOD/SCID マ ウ ス within で の long-term hematopoietic can build again を す る hematopoietic stem cells に す seaborne る heritage 伝 son import working rate を 検 please try を み た. ま ず posthumous son 伝 import す る hematopoietic stem cells の ソ ー ス と し て, bone marrow and umbilical blood 帯 の と CD34 positive cells に つ い て, そ の に in containing ま れ る hematopoietic stem cells を compare 検 の traits for し た. Bone marrow and can build は umbilical blood 帯 の CD34 positive cells の party が remote か に optimal れ て い る こ と が confirm さ れ, but 伝 import be 験 の ソ ー ス と し て は umbilical blood 帯 の を CD34 positive cells with い て line う こ と と し た. Now written の サ イ ト カ イ ン の group み close わ せ で umbilical blood 帯 CD34 positive cells に heritage 伝 son import を し て い る が に rate very high に CD34 positive cells に GFP posthumous son 伝 import が may で あ り, そ こ か ら form さ れ る コ ロ ニ ー cells に も high rate に GFP heritage 伝 son が import さ れ て い る こ と が confirm で き た. Now, NOD/SCID て ウスに transplants the <s:1> GFP <e:1> from the living cells and を various organs で検 and である.

项目成果

Ueda T: "Hematopoietic repopulating ability of cord blood CD34(+)cells in NOD/Shi-scid mice"Stem Cells. 18. 204-213 (2000)

Ueda T：“NOD/Shi-scid 小鼠脐带血 CD34(+) 细胞的造血再生能力”干细胞。

Ueda T.: "Hematopoietic capability of cord blood CD34+cells : A comparison with that of adult bone marrow CD34+cells"International Journal of Hematology. 73. 457-462 (2001)

Ueda T.：“脐带血 CD34 细胞的造血能力：与成人骨髓 CD34 细胞的比较”国际血液学杂志。

Ueda T: "Expansion of human NOD/SCID-repopulating cells by stem cell factor, Flk2/Flt3 ligand, thrombopoietin, IL-6 and soluble IL-6 receptor."The Journal of Clinical Investigation. 105. 1013-1021 (2000)

Ueda T：“通过干细胞因子、Flk2/Flt3 配体、血小板生成素、IL-6 和可溶性 IL-6 受体扩增人类 NOD/SCID 再生细胞。”《临床研究杂志》。