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小脳特異的な低域値型カルシウムチャネルノックアウトマウスの作製と機能解析

小脳特異的な低域値型カルシウムチャネルノックアウトマウスの作製と機能解析
小脑特异性低阈值钙通道敲除小鼠的产生及功能分析
批准号：
13878165
负责人：
狩野 方伸
金额：
$1.28万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2001 至 2002
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13878165/
关键词：
カルシウムチャネルマウス細胞特異的ノックアウトCre-loxPシステム小脳プルキンエ細胞カルシウムチャンネルCre-1oxpシステム

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项目成果

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本研究では、低閾値型カルシウムチャネルα1Gの小脳機能における役割を明らかにするため、α1G遺伝子コンディショナルノックアウトマウスの作製を目的としている。昨年度、相同組み換えを生じた2種のES細胞クローンを用いて、キメラマウスの作製を行ったが、どのクローン由来のキメラマウスも生殖系列へのES細胞伝達を示さなかった。今年度は、昨年作製したターゲッティングベクターの相同組み換え領域を2kb延長して、再度ES細胞で相同組み換え体をクローニングした。その結果、おおよそ1%の確率で相同組み替えを生じたES細胞がクローニングできた。クローニングしたES細胞を用いて、マウス胚盤胞へのインジェクションを行ったところ、現在、ES細胞の寄与率の高いキメラマウスが誕生している。今後はこのキメラマウスを野生型マウスと交配してヘテロマウスを作製する予定である。さらに、小脳プルキンエ細胞特異的にα1G遺伝子を欠損させるため、プルキンエ細胞特異的にCre組み換え酵素を発現するトランスジェニックマウスのベクターの作製も行った。今後は、このベクターを用いてトランスジェニックマウスを作出し、上記のヘテロマウスと交配させる予定である。さらにα1Gサブユニット特異的な力価の高い抗体が存在しないため、α1G細胞内ループ領域を抗原タンパクとして大腸菌で合成し、ウサギを用いてポリクローナル抗体の作製を行った。作製し精製した抗体は、Western blot法により小脳抽出物中のα1Gサブユニットだと考えられる260kDaのバンドを特異的に認識した。今後は、ノックアウトマウスの解析に有効に使いたいと考えている。
期刊论文(23)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Ohno-Shosaku, T.: "Presynaptic cannabinoid sensitivity is a major determinant of depolarization-induced retrograde suppression at hippocampal synapses"J. Neurosci.. 22. 3864-3872 (2002)
Ohno-Shosaku, T.：“突触前大麻素敏感性是海马突触去极化诱导逆行抑制的主要决定因素”J.
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
少作隆子: "カンナビノイド受容体 (Annual Review 神経 2003)"中外医学社. 7 (2003)
Takako Shosaku：“大麻素受体（神经病学年度评论 2003）”Chugai Igakusha 7 (2003)。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
T.Yoshida: "The cannabinoid CB1 receptor mediates retrograde signals for depolarization-induced suppression of inhibition in cerebellar Purkinje cells"J. Neurosci.. 22. 1690-1697 (2002)
T.Yoshida：“大麻素 CB1 受体介导逆行信号，以抑制小脑浦肯野细胞去极化诱导的抑制作用”J.
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Ichikawa, R.: "Distal extension of climbing fiber territory and multiple innervation caused by aberrant wiring to adjacent spiny branchlets in cerebellar Purkinje cells lacking glutamate receptor GluRδ"J. Neurosci.. 22. 8487-8503 (2002)
Ichikawa, R.：“缺乏谷氨酸受体 GluRδ 的小脑浦肯野细胞中攀爬纤维区域的远端延伸和多刺分支异常布线引起的”J. Neurosci. 22. 8487-8503 (2002)
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 12 条
    Influence of altered synapse pruning in the developing cerebellum on mouse behaviors relevant to autism spectrum disorder and schizophrenia
    活動性の高いニューロンへの光穿孔による選択的遺伝子導入
    • 批准号：
      25640007
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
    • 资助金额：
      $2.5万
    • 财政年份：
      2013
    • 负责人：
      狩野 方伸
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    シナプスにおける逆行性シグナルが生後発達期の機能的神経回路形成に果たす役割の解明
    • 批准号：
      25000015
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Specially Promoted Research
    • 资助金额：
      $353.93万
    • 财政年份：
      2013
    • 负责人：
      狩野 方伸
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    分界条床核における内因性カンナビノイドを介するシナプス伝達修飾に関する研究
    • 批准号：
      12F02794
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for JSPS Fellows
    • 资助金额：
      $1.47万
    • 财政年份：
      2012
    • 负责人：
      狩野 方伸
    • 依托单位：
      The University of Tokyo
    海外基金