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人工神経回路を用いた小脳シナプス淘汰の研究

利用人工神经回路进行小脑突触选择的研究

基本信息

批准号：
11878162
负责人：
狩野方伸
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では培養系において単離小脳プルキンエ細胞に対するシナプス形成過程のリアルタイム分析を目指している。第1段階として、マウス・プルキンエ細胞の単離培養系の開発を行い、さらに培養プルキンエ細胞の発達過程を分析した。小脳ニューロンに最適化した無血清培地(Furuya et al.,1998)を用い、さらに播種密度などの諸条件を系統的に検討した結果、従来難しかったマウス胎児由来単離小脳プルキンエ細胞の長期(1ヶ月以上)培養が可能となった。また、この方法により培養したプルキンエ細胞では樹状突起形態や電気的興奮特性の発達が生体内での生後発達と良く似た時間推移で進行し、所期の実験遂行に適当であることが分かった。第2段階として、上記の培養系に下オリーブ核ニューロンをの共培養する技術を開発した。2〜3日前に準備しておいた小脳ニューロン培養系の上に妊娠16日齢マウス胎児由来の下オリーブ核スライスを貼付することにより、登上線維を数百ミクロンにわたって出芽・伸展させることに成功した。また共培養開始直前にgene gunを用いて蛍光色素DiIを付着させた金属微粒子を下オリーブ・スライスに打ち込む技術も開発した。この技術により、生きたままの状態で登上線維を効率良く標識できるようになった。さらにDiI標識像をレーザー共焦点顕微鏡で5〜10分毎に観察することにより、登上線維の伸展の様子を24時間以上にわたりリアルタイムで観察することに成功した。現在、第3段階として、GFP遺伝子を導入し自家蛍光を発するようにしたプルキンエ細胞を単離培養系の材料として用い、DiI標識登上線維のGFP標識プルキンエ細胞に対する神経支配過程のリアルタイム分析を進めている。なお、培養法に関する成果はJournal of Neuroscience Methods (Tabata et al.,104:45-53,2000)に発表した。また、培養法の応用に関する論文をProc.Natl.Acad.Sci.USA.(Furuya et al.,97:11528-11533,2000)に発表し、Journal of Neuroscienceにも投稿中である。

The purpose of this study is to analyze the process of the formation of the disease in the process of analysis. The first paragraph of this paper is to analyze the process of training students in the first paragraph. This is the most effective way to develop serum-free culture (Furuya et al.,1998). The results of the test results of the system of density training conditions, the causes of pregnancy and the possibility of long-term (more than 1 month) training. The temperature characteristics of the cell-like protuberance of the mobile phone are up to the standard in the body. After birth, it is as if time has passed to carry out the battery, and the intended equipment will be operated as soon as possible. In the second paragraph, the training program and the upper training department are responsible for the development of joint training and technical training. A few days ago, I was ready to tell you that I was pregnant on the 16th of pregnancy, the origin of the pregnancy Before the start of the co-culture, the gene gun was used to use the light pigment DiI to treat the metal particles under the microscope. The status of technical information and health information is registered in the information system, and the information about the quality of the product and the quality of the mark is registered. For example, the DiI header has been in focus for more than 24 hours after 5: 10 minutes of monitoring and logging on to the mobile phone. Now, in the third paragraph, the GFP system has been registered in its own company. In the system, the materials are used, and the DiI tags are registered. The process is controlled by the analysis of the process. The results of Journal of Neuroscience Methods (Tabata et al.,104:45-53 Personality 2000) are listed in this table. The papers Proc.Natl.Acad.sci. USA. (Furuya et al.,97:11528-1153MAG 2000) were used in the table and Journal of Neuroscience were used in the contribution.