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ランダムリボザイムライブラリーを用いた新規セントロメアタンパク質の同定

使用随机核酶文库鉴定新型着丝粒蛋白

基本信息

批准号：
15657002
负责人：
深川竜郎
金额：
$ 2.11万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

生物が生命を維持するためには、ゲノム情報を包括する構造体である染色体が安定に保持・増殖されなければならない。我々は、染色体が安定に保持されるための分子機構として染色体分配機構に注目して研究を行っている。細胞周期のS期で複製された染色体は、M期では両極から伸びた紡錘体に捕らえられ、娘細胞へと分配される。この際、紡錘体が結合する染色体の特殊領域はセントロメアと呼ばれ、その領域に存在するDNAと複数のタンパク質から構成される。現在までに、高等動物のセントロメアを構成するタンパク質は十数個知られているが、それがすべてのセントロメア構成タンパク質とは思われていない。我々はランダムリボザイムライブラリーや、プロテオミクス、新規バイオインフォティクスなどのユニークな手法を用いて新規セントロメアタンパク質の同定を試みた。1)ランダムリボザイムライブラリーを用いた手法は、リボザイムの作成方法などに問題があり、この方法で新規タンパク質の同定を行うことはできなかった。2)プロテオミクスの手法を用いて複数の新規タンパク質が同定できた。具体的な実験としては、セントロメア構成タンパク質であるCENP-HおよびCENP-Iの発現をタグ付き融合タンパク質の発現に置換した細胞株を樹立して抗タグ抗体を用いた免疫沈降実験を行った。その結果、CENP-HとCENP-Iと結合する5種類のタンパク質を同定した。いずれも、セントロメアに局在することが知られていなかったタンパク質であった。それぞれのタンパク質をGFP融合タンパク質としてニワトリ細胞内で発現させた結果、いずれも構成的セントロメアタンパク質であると結論できた。3)新規バイオインフォティクスの手法では、候補遺伝子の絞り込みが完了した。現在実験的に局在を解析しているが、期待に反してセントロメアへ局在するタンパク質はこの方法から得られていない。各種方法を試した結果、現時点ではプロテオミクスを駆使した方法が最も効率的であると考えられた。

Life support, including chromosome stability and reproduction The molecular mechanism for chromosome stability maintenance and chromosome allocation is studied. The S phase of the cell cycle replicates chromosomes and M phases of the cell cycle. In this case, the spindle is bound to a special region of the chromosome, which is composed of DNA and multiple chromosomes. Now, the higher animals are composed of ten kinds of materials. We are trying to determine the quality of the new regulations by using the new regulations. 1) The method of making a new file is to use the method of making a new file. 2) A number of new rules and regulations are used to determine the quality of the software. The cell line was established using CENP-H and CENP-I. The results of CENP-H and CENP-I are consistent with the quality of the five categories. The first time I saw him was when I saw him. The results of GFP fusion in cells and the results of GFP fusion in cells are as follows: 3)The new rule is that the candidate's name is the same as the candidate's name Now the situation is analyzed and expected to change. The situation is analyzed and expected to change. All kinds of methods are tested, and the current point is to make the method more effective.