染色体工学を用いたセントロメアを中心とするゲノム構築原理の解明

利用染色体工程阐明以着丝粒为中心的基因组构建原理

• 批准号: 15011218
• 负责人: 深川 竜郎
• 金额: $ 3.52万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15011218/
• 关键词: セントロメア; DT40; CENP-A; Nuf2; Hec1; RNAiマシーナリー; Dicer; ゲノム構築原理

ゲノム配列が解読された後は、ゲノムそのものが構築される原理を解明することが重要である。本研究では複雑なゲノム構築原理の内、ゲノム分配機構に焦点を当て染色体工学的な手法を用いて、高等動物セントロメアの形成機構の解明を目指す。本年度は、これまでの研究の継続性を重視してニワトリB細胞由来のDT40細胞を用いてCENP-A、Nuf2、Hec1を対象に条件的ノックアウト細胞の作成と表現型の解析を行った。以下に結果を述べる。1)Nuf2およびNuf2と相互作用するセントロメアタンパク質Hec1のノックアウト株を作成した。両ノックアウト細胞株の表現系解析から、いずれの株も約450分の細胞分裂遅延を起こした後死滅することが分かった。その際、CENP-A,-C,-Hなどのインナーセントロメアタンパク質の局在に変化は見られなかった。一方CENP-HやCENP-Iのノックアウト株においてNuf2やHec1の量が減少していた。また、Hec1は細胞周期チェックポイントタンパク質であるMad2と結合していることが分かった。さらにFRAP解析の結果、Nuf2複合体はセントロソームにおいてダイナミックな挙動をして、セントロメアでは、安定した構造をとることを明らかにした。2)CENP-Aのノックアウト細胞でBubR1というチェックポイントタンパク質の局在が失われた。CENP-Aのノックアウト株では、最初に紡錘体チェックポイント機構の活性化が起きて、細胞周期がM期で遅延した後、分裂後期に入って行くことから、CENP-Aはチェックポイントの「活性化」より「維持」に影響を与えると結論した。3)ヒト染色体由来の人工染色体を保持するDT40細胞を対象にして、RNAiマシーナリーに関与するDicer遺伝子の条件的ノックアウト細胞を樹立した。Dicerの発現が失われた細胞で、ヒト人工染色体のセントロメア領域からのRNA転写が確認できた。セントロメア形成に関わるDicerの影響を現在解析している。

In order to understand the principles of the system, it is necessary to explain how important it is. In this study, in the principles of computer science, the focus of the distribution mechanism is based on the use of techniques in chromosome engineering, and the formation mechanism of advanced animal science is used to understand the target. This year's research focuses on the origin of the DT40 cell. The DT40 cell uses the data of the CENP-A, Nuf2, and Hec1 conditions to form a table of analytical data. The following results describe the following results. 1) the interaction between Nuf2 plants and Nuf2 plants is caused by the interaction between Hec1 plants and other plants. The phenotypic analysis of the cell line showed that the cell division of the plant was about 450 minutes, and the cell division was delayed and then died. The international, CENP-A,-C,-H and local governments are concerned that the government is in the process of making progress. On one side, CENP-H

项目成果

Tetsuya Hori: "Dynamic behavior of Nuf2-Hec1 complex that localizes to the centrosome and centromere and is essential for mitotic progression in vertebrate cells"Journal of Cell Science. 116. 3347-3362 (2003)

Tetsuya Hori：“Nuf2-Hec1 复合物的动态行为定位于中心体和着丝粒，对于脊椎动物细胞的有丝分裂进展至关重要”《细胞科学杂志》。

Vinciane Regnie: "Characterization of chicken CENP-A and comparative sequence analysis of vertebrate centromere-specific histone H3-like proteins"Gene. 316. 39-46 (2003)

Vinciane Regnie：“鸡 CENP-A 的表征和脊椎动物着丝粒特异性组蛋白 H3 样蛋白的比较序列分析”基因。

深川竜郎: "セントロメア特異的なクロマチン構造"生体の科学. 54. 179-184 (2003)

Tatsuo Fukakawa：“着丝粒特异性染色质结构”《生物科学》54. 179-184 (2003)。

深川竜郎: "染色体分配に必須な構造:動原体"細胞工学. 22. 267-271 (2003)

Tatsuo Fukakawa：“染色体分离所必需的结构：着丝粒”《细胞工程》22. 267-271 (2003)。

深川竜郎: "動物細胞のM期での動態の可視化"遺伝子医学. 7. 96-100 (2003)

深川龙雄：《动物细胞M期动力学的可视化》《遗传医学》7. 96-100 (2003)。