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高分子バイオコンジュゲート化アデノウイルスベクターの粒子設計とその評価

聚合物生物共轭腺病毒载体的颗粒设计和评估

基本信息

批准号：
15659038
负责人：
中川晋作
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659038/
关键词：
遺伝子治療アデノウイルスベクター PEG バイオコンジュゲーション RGD

项目摘要

本研究では、合成高分子としてPolyethylene Glycol (PEG)を用いて最適な遺伝子治療を達成するための高分子バイオコンジュゲート化アデノウイルスベクター(Ad)の創製を行う。昨年度は、AdのPEG修飾法を確立し、PEG修飾Ad遺伝子発現特性を評価した。その結果、PEG修飾率の増大に伴って遺伝子発現効率が低下した。本結果は、Ad表面のPEGにより立体障害的にCARやインテグリンへの結合が阻害されたためであると考えられる。そこで本年度は、修飾高分子にRGDモチーフを付与することにより、高分子ハイブリッド化Adのインテグリンへの結合を可能とし、Adの優れた遺伝子導入効率・発現効率を損ねることなく、Adの欠点だけを克服したハイブリッド化Adの創製を目指した。まず、RGD-PEG修飾AdはCAR高発現細胞に対してPEG修飾Adより顕著に高い遺伝子発現を示し、未修飾Adと同等の遺伝子発現を示した。また、CAR低発現細胞に対してRGD-PEG修飾Adは、未修飾Adより100倍以上高い遺伝子発現を示し、その発現はファイバーにRGDモチーフを直接導入したAd(AdRGD)と同等であった。さらにRGD-PEG修飾Adを抗Ad抗体存在下でCAR低発現細胞に感染させ、24時間後の遺伝子発現量を測定した結果、koreまで最も高い遺伝子導入効率を示したAdRGDであっても抗Ad血清濃度の上昇に伴い遺伝子発現は急激に低下したのに対して、RGD-PEG修飾Adは遥かに高い遺伝子発現を保持し、その抗体回避能はAdRGDの15倍であった。以上PEGの片末端にRGDペプチドを付与したRGD-PEGを用いることにより、抗Ad抗体存在下でも、AdRGDを上回る高い遺伝子発現が得られるベクターの開発に成功した。

In this study, we aim to create synthetic polymers such as Polyethylene Glycol (PEG), which can be used to achieve optimal molecular therapy. The PEG modification method of Ad was established and the development characteristics of PEG modified Ad were evaluated. As a result, the PEG modification rate increased while the generation rate decreased. The results show that PEG on Ad surface can inhibit the formation of a three-dimensional barrier. This year, the polymer RGD was added to the system. The polymer RGD was added to the system. PEG-modified Ad and unmodified Ad were shown to have high protein expression in CAR cells. RGD-PEG modified Ad and unmodified Ad are 100-fold higher in protein expression, and RGD-PEG modified Ad and unmodified Ad are directly introduced into CAR cells. In the presence of RGD-PEG-modified Ad, CAR cells were infected with low levels of anti-Ad antibody. The results showed that the highest level of anti-Ad antibody was detected after 24 hours. The highest level of anti-Ad antibody was detected after 24 hours. The highest level of anti-Ad antibody was detected after 24 hours. The RGD gene was successfully developed in the presence of anti-Ad antibody and AdRGD gene.