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リンパ管システムに関わる分子の網羅的スクリーニング

全面筛选淋巴系统相关分子

基本信息

批准号：
15659230
负责人：
尾池雄一
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

(目的)リンパ管内皮細胞よりリンパ管の発生、新生に重要な分子を網羅的に単離同定しその後、リンパ管新生の分子基盤を明らかにする。(方法)(1)マウスリンパ管腫モデルを作製し、そのリンパ管内皮細胞をラットの腹腔内に注入し細胞の表面抗原に対する抗体を網羅的に作製する。(2)リンパ管内皮細胞に特異的に発現しているLYVE-1に着目し、マウスLYVE-1に対するモノクローナル抗体を作製しリンパ管内皮細胞を単離・純化し、血管内皮細胞と発現している分子、機能などの点を比較検討する。(結果)(1)マウスリンパ管腫細胞をラットの腹腔内に注入し細胞の表面抗原に対する抗体作成の過程でXXXクローンのハイブリドーマをELISA及び免疫染色でスクリーニングした結果YYクローンのリンパ管腫由来リンパ管内皮細胞を特異的に認識する抗体が得られた。その後、様々な方法でこの抗体の認識する分子を同定する試みをしたが、結果的には不成功に終わった。(2)マウスLYVE-1に対するモノクローナル抗体を3クローン樹立することに成功した。3クローン間に差はなく、免疫組織染色、FACS解析においてリンパ管内皮細胞を認識できる抗体であることを確認した。現在までにリンパ管内皮に特異的と報告されている分子(SLC、Podoplanin、prox1)は、その報告通りであったが、血管内皮細胞で発現が報告されている分子に関しては弱くリンパ管内皮細胞に発現する分子群(CD44、TIE2、Flt1)と同等に発現する分子群(CD31、TIE1、Flk1)に分かれることを見出した。(考察)LYVE-1に対するモノクローナル抗体の樹立に成功し、リンパ管の同定、純化、単離が可能になったことは、これまでの多くのtoolを海外に頼ってきた国内のリンパ管研究者には朗報であると考える。今後、この抗体を用いて網羅的な解析手法を用いて血管内皮細胞と比較しつつリンパ管内皮細胞を明らかにしていきたいと考えている。

Objective: To investigate the molecular basis for the development and regeneration of vascular endothelial cells. (Method)(1) The control of the tumor cells and the control of the tumor cells by intraperitoneal injection of the cell surface antigen. (2)LYVE-1 is a protein specific to vascular endothelial cells. It is a protein specific to vascular endothelial cells. LYVE-1 is a protein specific to vascular endothelial cells. (Results)(1) The process of antibody preparation for intraperitoneal injection of vascular endothelial cells and specific recognition of vascular endothelial cells by ELISA and immunostaining The method of molecular identification of the antibody was unsuccessful. (2)LYVE-1 is the most effective way to build a good team. 3. Immunohistochemical staining, FACS analysis and identification of endothelial cells Now we have identified molecules specific to vascular endothelial cells (SLC, Podoplanin, Prox1), molecules associated with vascular endothelial cell development (CD44, TIE2, Flt1), and molecules associated with vascular endothelial cell development (CD31, TIE1, Flk1). (Investigation)LYVE-1 is the most effective way to identify, purify, isolate, and develop antibodies against LYVE-1. In the future, this antibody will be used in the analysis of vascular endothelial cells and compared with vascular endothelial cells.