染色体部位特異的遺伝子導入法開発と表皮水疱症遺伝子治療への応用

染色体位点特异性基因转移方法的开发及其在大疱性表皮松解症基因治疗中的应用

• 批准号: 18659324
• 负责人: 玉井 克人
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659324/
• 关键词: 遺伝子相同組み換え; VII型コラーゲン; 遺伝子治療; BACクローン; トランスボゾン

表皮水庖症を始めとする遺伝性疾患の根治的治療を可能にするためには、標的細胞の遺伝子異常部位を正常復帰させる新たな方法論の開発が必要である。我々は、以下の3つの方法論をデザインし、その遺伝子組み換え効率に関する検討を進めた。1)BACクローンを用いた高効率遺伝子組み換え法の確立:VII型コラーゲン遺伝子COL7A1領域を含むbacterial artificial chromosome (BAC)クローンを用いてCOL7A1の3'および5'末端側のそれぞれに約20kbのアームを持ったCOL7A1組み換え用BACベクターを作成した。これを用いてCOL7A1ノックアウトマウス由来の種々の細胞におけるCOL7A1領域の組み換え効率検討を進めた。2)トランスポゾンを持つ遺伝子発現ベクターの高効率DNA組み換え能を利用し、1)で作成したBAC由来COL7A1組み換えベクター内にトランスポゾン配列を挿入し、相同組み換え効率向上の可能性を検討した。3)マウス線維芽細胞株NIH3T3にGFP-EcoRI-Puro発現プラスミドベクターを導入し、ピューロマイシン存在下に培養して染色体内に安定的にプラスミドが組み込まれた細胞を選択した。次にこの細胞よりDNAを抽出し、種々の制限酵素で切断した後に、GFPおよびEcoRI配列をそれぞれ含むプライマーDNAを用いてPCRを施行し、増幅されたDNA断片の塩基配列を決定することにより、染色体内の挿入部位の同定を進めた。高頻度に遺伝子組み換えが起き、かつ遺伝子間の非機能領域にあることが予想される部位を同定し、同領域を含むBACクローンを用いて1)および2)の方法を応用した高効率相同組み換え法の開発を進めた。

Epidermal hygromas, the first and most common treatment for rickets, is possible and standard. It is necessary to restore the abnormal parts of the cells to the normal state according to the new methodology. I 々は, the following の3つのmethodology をデザインし, その伝sub组みchangeえefficiencyに关する検 Discussion を进めた. 1) Establishment of BAC クローンを high-efficiency artificial chromosome replacement method: Type VII コラーゲンゲンゲンをContains bacterial artificial chromosome in the field of COL7A1 (BAC) クローンを Use いてCOL7A1の3'および5'end side のそれぞれにAbout 20kb のアームをholding ったCOL7A1 group みchangeえ was made with BAC ベクターを. We have used the COL7A1 field of COL7A1 to replace the efficiency of the cell from the origin of COL7A1. 2) The origin of the high-efficiency DNA group that can be used in high-efficiency DNA assembly, 1) The origin of the BAC that was created The COL7A1 group replacement system has a high efficiency and the possibility of improving the efficiency of the same group replacement is also high. 3) Introducing the MASHU cells line NIH3T3 and GFP-EcoRI-Puro プラスミドベクターをIn the presence of し, ピューロマイシン, the にプラスミドが group of にプラスミドが cells were cultured in the presence of して chromosomes and selected した. Sub-cell DNA extraction, seed restriction enzyme cutting, and GFP EcoRI alignment containment NA is performed using PCR, amplification of DNA fragments, determination of base alignment, and identification of insertion sites within chromosomes. High-frequency に伝子组みchangeえが开き, かつ伝子间の无functional domain にあることが yu want to される location を同定し, 同令Domain を contains むBAC クローンを いて1) および2) の method を応用 し た み change え 法 の 开発 を 入めた with high efficiency.

项目成果

Needleless intranasal administration of HVJ-E containing allergen attenuates experimental allergic rhinitis.

无针鼻内施用含有过敏原的 HVJ-E 可减轻实验性过敏性鼻炎。

• 发表时间: 2007
• 期刊: J Mol Med (In press)
• 作者: Yasuoka E;Oshima K;Tamai K;Kubo T;Kaneda Y.
• 通讯作者: Kaneda Y.

Dominant dystrophic epidermolysis bullosa caused by a novel G2037R mutation and by a known G2028R mutation in the type VII collagen gene(COL7A1)

由 VII 型胶原基因 (COL7A1) 中的新 G2037R 突变和已知 G2028R 突变引起的显性营养不良性大疱性表皮松解症

• 发表时间: 2006
• 期刊: Dermatol 33(8)
• 作者: Twata T;Nakano H;Nakano A;Toyomaki Y;Tamai K;Tomita Y.
• 通讯作者: Tomita Y.

Interferon-gamma down-regulates expression of the 230-kDa bullous pemphigoid antigen gene (BPAG1) in epidermal keratinocytes via novel chimeric sequences of ISRE and GAS

干扰素-γ 通过 ISRE 和 GAS 的新型嵌合序列下调表皮角质形成细胞中 230 kDa 大疱性类天疱疮抗原基因 (BPAG1) 的表达

• 发表时间: 2006
• 期刊: Exp Dermatol 15
• 作者: Kakizaki I;Takahashi R;Ibori N;Kojima K;Takahashi T;Yamaguchi M;Kon A;Takagaki K;Kondo N;Yamaguchi M;Morohashi H;Kaneko T
• 通讯作者: Kaneko T

Acceleration of wound healing by combined gene transfer of hepatocyte growth factor and prostacyclin synthase with Shima Jet

• DOI: 10.1038/sj.gt.3302767
• 发表时间: 2006-08-01
• 期刊: GENE THERAPY
• 影响因子: 5.1
• 作者: Kunugiza, Y.;Tomita, N.;Morishita, R.
• 通讯作者: Morishita, R.