世界最長のマルチ亜鉛フィンガーの創製と新機能

创造世界最长多锌指及新功能

• 批准号: 16659028
• 负责人: 杉浦 幸雄
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Doshisha Women's College of Liberal Arts (2005)Kyoto University (2004)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659028/
• 关键词: 亜鉛フィンガー; マルチフィンガー; DNA結合; 塩基配列特異性; リンカー配列; 遺伝子機能; タンパク質設計; モチーフ; 長鎖認識

亜鉛フィンガータンパク質によるDNA塩基認識の特徴は、1)亜鉛フィンガー当り3塩基の認識、2)非対称なDNA塩基配列の認識、そして3)直列につながったDNA塩基配列の認識である。この特徴は新しい亜鉛フィンガー、特にマルチ亜鉛フィンガーの分子設計に極めて魅力的なフレームワークを与えている。転写因子Sp1由来の3つの亜鉛フィンガーモチーフを1ユニットとして、5ユニットを良く保存されたリンカーアミノ酸(TGEKP)によって連結させ、15個の亜鉛フィンガーが直列に並んだ新規亜鉛フィンガータンパク質を遺伝子工学的に作製した。本新規マルチフィンガータンパク質のDNAに対する特異的ゲルシフト法やフットプリント法によって検討した結果、GCボックスDNAへは7.0nMの高い結合親和性を示し、また約50塩基対に及ぶ広いフットプリントを与えた。これは15個の亜鉛フィンガーがすべてDNAとのコンタクトに関与していることを示唆している。生体内には多数のマルチ亜鉛フィンガータンパク質が存在し、実際、本研究成果が公表された後、植物界から類似の15個の亜鉛フィンガーをもつタンパク質が単離・同定された。この15-亜鉛フィンガータンパク質は人工的に創製された亜鉛フィンガータンパク質の中で最高最長のものである。マルチ亜鉛フィンガータンパク質は長鎖DNAの認識に最適であり、今後、重要な転写反応における人工リプレッサーとしての利用が期待できる。

The characteristics of DNA base recognition are: 1) DNA base recognition; 2) DNA base alignment recognition; 3) DNA base alignment recognition. This feature is reflected in the extremely charming ー and the molecular design of the new ー. The writing factor Sp1 is derived from the 3-digit number of lead atoms, 1-digit number of lead atoms, 5-digit number of lead atoms, and good preservation of lead atoms (TGEKP). This new regulation shows high binding affinity of 7.0 nM for DNA, and low binding affinity for DNA. This is the first time that we've had a chance to talk to each other. In vivo, there are 15 similar species in the plant kingdom. In fact, the results of this study have been published. This 15-digit number is the longest number of digits in the highest number of digits in the highest number of digits. In the future, it will be important to write anti-DNA and to look forward to its utilization.

项目成果

Creation and Characteristics of Unnatural CysHis_3-Type Zinc Finger Protein

非天然CysHis_3型锌指蛋白的构建及特性

• 发表时间: 2004
• 期刊: Biochem.Biophys.Res.Commun. 325・2
• 作者: Kusaba;M.;S.Misumi;N.Takamune;S.Shoji et al.;Tetsuya Oshikawa;Hideko Nagasawa;T.Hirata;M.Imanishi;S.Negi
• 通讯作者: S.Negi

Sequence-Selective and Hydrobytic Cleavage of DNA by Zinc Finger Mutants

锌指突变体对 DNA 的序列选择性和水解切割

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Am.Chem.Soc. 126・47
• 作者: S.Kunimoto;W.Murofushi;H.Kai;Y.Ishida;A.Uchiyama;T.Kobayashi;S.Kobayashi;H.Murofushi;K.Murofushi-Murakami;A.Nomura
• 通讯作者: A.Nomura

Effects of linking 15-zinc finger domains on DNA linding specificity

连接 15-锌指结构域对 DNA 结合特异性的影响

• 发表时间: 2005
• 期刊: Bioorg.Med.Chem.Lett. 15・9
• 作者: Kusaba;M.;S.Misumi;N.Takamune;S.Shoji et al.;Tetsuya Oshikawa;Hideko Nagasawa;T.Hirata
• 通讯作者: T.Hirata

An artificial six-zinc finger peptide with polyarginine linker

具有聚精氨酸接头的人工六锌指肽

• 发表时间: 2005
• 期刊: Biochem.Biophys.Res.Commun. 333・1
• 作者: Kusaba;M.;S.Misumi;N.Takamune;S.Shoji et al.;Tetsuya Oshikawa;Hideko Nagasawa;T.Hirata;M.Imanishi
• 通讯作者: M.Imanishi