亜鉛フィンガーモチーフによるDNA認識と遺伝子ターゲティング

锌指基序的 DNA 识别和基因靶向

• 批准号: 10145226
• 负责人: 杉浦 幸雄
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10145226/
• 关键词: 亜鉛フィンガー; DNA結合モチーフ; 遺伝子ターゲティング; 塩基認識; 転写制御; 人工蛋白質

亜鉛フィンガー型DNA結合モチーフは、その繰り返し構造ゆえに約3塩基ずつ認識するモジュールの連結体として見ることができ、このような特徴は亜鉛フィンガーモチーフの数を変化させることにより、任意の塩基数を認識させることが可能である。転写因子Sp1のCys_2-His_2型亜給フィンガニドメインを用いた18および27塩基加NA配列を認識する人工蛋白質の創製に始めて成功した。すなわち、Sp1の3個の亜鉛フィンガー領域を基本単位として、5アミノ酸残基のリンカーで連結させた新規蛋白質Sp1ZF6とSp1ZF9を遺伝子工学的に合成し、そのDNA結合様式ゲルシフト法、フットプリント法、メチル化干渉法などを用いて追究した。その結果、Sp1ZF6とSp1ZF9はほぼ同程度のDNA結合親和性を示した。また、GCボックスを3個連続して含むDNAフラグメントを用いて結合実験を行ったところ天然Sp1は互いに隣接しない位置に2公子結合するのに対し、Sp1ZF6とSp1ZF9はGCボックスの3'末端側の1ヶ所で1分子結合することが認められた。特に重要なことは、Sp1ZF6とSp1ZF9は、それぞれ連続した18および27塩基対配列に結合していることで、これは新規蛋白質が任意の長さの連続する非対称DNNA配列に選択的に結合できることを強く示唆している。このような亜鉛フィンガーによるDNA塩基認識を基礎にした新しい遺伝子制御分子の創製は、21世紀の遺伝子治療への貢献が期待される。

The number of DNA binding sites in a DNA binding site is about 3 base pairs. The number of DNA binding sites in a DNA binding site is about 3 base pairs. The number of DNA binding sites in a DNA binding site is about 3 base pairs. The Cys_2-His_2 type gene encoding factor Sp1 has been successfully used to create artificial proteins with 18-and 27-amino acids and NA sequences. The basic positions of the three protein domains of Sp1, Sp2, Sp3, Sp4, Sp5, Sp6, Sp9, Sp9, Sp1, Sp9, Sp1, Sp2, Sp1, Sp2, Sp1, Sp1, Sp The results showed that Sp1 ZF6 and Sp1 ZF9 had the same DNA binding affinity. 3 links to GC include DNA, 2 links to natural Sp1, 3 links to Sp1, 3 links to GC include DNA, 3 links to Sp1, 3 links to GC include DNA, 3 links to GC, 3 links to GC include DNA, 3 links to GC, 3 links to GC, 3 In particular, it is important that the binding of Sp1ZF6 to Sp1ZF9 is not limited to the binding of 18 and 27 DNA pairs. The contribution of DNA gene therapy in the 21st century to the creation of new gene control molecules is expected.

项目成果

T.Kamiuchi: "Artificial Nine Zinc-Finger Peptide with 30 Base Pair Binding Sites" Biochemisrty. 37・19. 13827-13834 (1998)

T.Kamiuchi：“具有 30 个碱基对结合位点的人工九锌指肽”，生物化学 37・19（1998）。

今西 未来: "新規亜鉛フィンガータンパク質の創製" 化学. 53・7. 72-73 (1998)

今西未来：“新型锌指蛋白的创造”化学53・73（1998）。

M.Yokono: "Unique DNA Bindinh Mode of the N-Terminal Zinc Finger of Transcription Factor Sp1" Biochemisrty. 37・19. 6824-6832 (1998)

M. Yokono：“转录因子 Sp1 N 末端锌指的独特 DNA 结合模式”，生物化学 37・19（1998）。