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siRNA法による全メタロチオネイン分子種発現抑制細胞の作成

使用 siRNA 方法创建抑制所有金属硫蛋白分子种类表达的细胞

基本信息

批准号：
16659034
负责人：
永沼章
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト体内に蓄積したカドミウムの大部分は生体防御蛋白質メタロチオネインと結合することによってその毒性発現が抑えられている。ヒトのメタロチオネインには10種以上の構造的に類似する分子種が存在するが、このように多くの分子種が存在する意義は全く分かっていない。この疑問を解くためには、全てのメタロチオネイン分子種を欠損したヒト由来細胞が研究材料として必須である。そこで、本研究では全てのメタロチオネイン分子種の発現が抑制されたヒト培養細胞をsiRNA法を用いて樹立すると共に、本細胞に、siRNAによって認識されないように工夫を凝らしたメタロチオネイン分子種の遺伝子を一つずつ発現させて、それぞれの分子種の機能の比較を可能とすることを目指した。全メタロチオネイン分子種に共通して存在する複数の塩基配列部分をそれぞれ含む種々のsiRNA発現プラスミドを構築し、それらを個々にヒト由来培養細胞に導入し、リアルタイムPCR法によって全メタロチオネイン分子種の発現程度をそれぞれ調べることによって、最も効率良く全てのメタロチオネイン分子種の発現を抑制するsiRNAを選択した。このsiRNA発現プラスミドを用いることによって、恒常的にsiRNAを発現する細胞株を得ることに成功した。この細胞が保持するメタロチオネイン分子種の発現は全て、有意に減少していることが確認され、また、本細胞はカドミウムに対して高い感受性を示した。この細胞中にメタロチオネインIまたはIIを単独で発現させることにも成功し、メタロチオネイン各分子種の作用検討に利用可能な細胞株を樹立することができた。

Most of the biological defense proteins were stored in the body, and most of them were isolated from the body. The combination of the biological defense proteins and the toxicity tests showed that there was a significant inhibition of toxicity. For more than 10 kinds of products, it seems that there is a cluster in each of the 10 or more products, and that there is an error in the number of multiple molecules that means full-scale distribution. It is doubtful that it is necessary to analyze the origin of the research materials in order to understand the importance of the molecular structure. The purpose of this study is to detect the inhibition of the molecular species in the cell culture system. The siRNA method has been used to determine the molecular weight of the molecular species. By using the method of cell culture, the siRNA method has been used to determine the molecular weight of the molecular species in this study. It is possible to compare the potential of molecular species to the target target. There is a general understanding of the presence of complex numbers in the molecular common language of the full-price siRNA. Some of the two-cell configuration contains several kinds of data, and the source of the two-way license is to be added to the cell. The PCR method does not allow for the implementation of the cluster, and the level of realization of the cluster. The most effective method is to suppress the selection of siRNA by using all kinds of molecular drugs. The cell line was successfully detected by using the constant siRNA cell line and the constant siRNA cell line in the same way. The cell maintains a high level of sensitivity. It is intended to make sure that the molecular species is fully available, and that it is intended to make sure that it is highly sensitive. In the cell, I was told that the II was isolated, that the cells were successful, that the molecules were responsible for the cell line, and that the cell line was isolated from the cell.