シスプラチン耐性に関与するヒト細胞内因子の酵母を用いた検索

使用酵母寻找与顺铂耐药相关的人类细胞内因子

基本信息

批准号：
12217014
负责人：
永沼章
金额：
$ 2.69万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217014/
关键词：
耐性遺伝子シスプラチン酵母転写因子発現抑制 Yap1

项目摘要

これまでに様々な細胞内因子がシスプラチンに対する耐性獲得因子として同定されてきたが,これらは共に一部のシスプラチン耐性細胞の耐性獲得因子となっていると考えられるものの,臨床上問題となる耐性がん細胞の中にはこれらの因子ではその耐性獲得機構を説明できない例も数多く存在する。我々は,遺伝子スクリーニングにより、酵母に強いシスプラチン耐性を与える機能未知の酵母遺伝子CRP1(HI22)およびCRP2を単離した。今回はCrp1およびCrp2の作用機構について検討した。両蛋白質は共にC末側にロイシンジッパー塩基性領域(bZip)を持ち、その構造上の特徴から転写因子であると考えられたが、GFPとの融合蛋白質強制発現法によりCrp1およびCrp2が共に常に核に局在する蛋白質であることが判明した。酸化的ストレスに応答し、ジアミドや過酸化水素などに対する耐性に関与する酵母転写因子として知られるYap1とCrp1またはCrp2との関係を検討したところ、CRP1またはCRP2遺伝子の高発現によって認められるシスプラチン耐性がYAP1遺伝子の欠損により増強され、さらに、ジアミドにより誘導されるYap1の転写活性がCrp1およびCrp2によって抑制されることが判明した。これらの結果は、Crp1またはCrp2がYap1の転写活性を抑制することによって酵母にシスプラチン耐性を与えている可能性を示唆している。この可能性は、Crp1が示すシスプラチン毒性軽減作用とYap1転写活性抑制作用に必要な最小ドメイン(蛋白質中領域)が一致することからも支持された。以上の結果から、酵母内にはシスプラチン毒性の発現を促進する蛋白質が存在し、Crp1およびCrp2はこの蛋白質の発現を抑制することによってシスプラチンの毒性を軽減するものと考えられる

各种细胞内因素已被确定为获得对顺铂的耐药性的因素，尽管这两个因素被认为是获得对某些顺铂细胞抗性的因素，但在许多情况下，在许多情况下，在临床上有问题的耐药性癌细胞无法解释这些因素获得抗药性的机制。我们分离了未知的酵母基因CRP1（HI22）和CRP2，它们通过基因筛选赋予对酵母的强烈顺铂耐药性。这次，我们研究了CRP1和CRP2的作用机理。两种蛋白质在C-末端都有亮氨酸拉链碱性区域（BZIP），并且由于其结构特征而被认为是转录因子，但发现与GFP，CRP1和CRP2强行表达融合蛋白是经常局部局部与核的蛋白。 When we investigated the relationship between Yap1 and Crp1 or Crp2, known as a yeast transcription factor that is responsible for resistance to diamides and hydrogen peroxide, in response to oxidative stress, we found that cisplatin resistance observed by high expression of the CRP1 or CRP2 gene is enhanced by a defect in the YAP1 gene, and furthermore, the transcriptional activity of Yap1 induced by diamide is suppressed by CRP1和CRP2。这些结果表明，CRP1或CRP2可能通过抑制YAP1的转录活性来赋予酵母的顺铂抗性。 CRP1表现出的顺铂毒性降低效应和YAP1转录活性的抑制作用的最小结构域（蛋白质区域）也支持了这种可能性。基于上述结果，人们认为存在一种蛋白质促进酵母中顺铂毒性的表达，并且CRP1和CRP2通过抑制该蛋白质的表达来降低顺铂的毒性。