メタロチオネインのアミノ酸置換が引き起こす影響

金属硫蛋白中氨基酸取代引起的影响

• 批准号: 15659140
• 负责人: 永沼 章
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659140/
• 关键词: カドミウム; メタロチオネイン; 遺伝子多型; ノックダウン細胞; siRNA

カドミウム毒性に対する防御蛋白質としてメタロチオネインが知られている。我々はメタロチオネインの遺伝子多型を検討し、転写開始地点の上流5塩基目とエクソン3領域に多型の存在を明らかにした。さらにエクソン部に塩基変異の認められた全例が転写開始地点上流にも変異有することも判明した。両多型の存在率から推定すると、この結果を偶然とは考えにくい。そうであれば、エクソン部と転写開始地点上流の両方に塩基変異のある人間は成人まで成長することができるが、エクソン3にのみ変異を有する個体は何らかの理由で生まれてこないか、生まれたとしても成人になる前に死亡してしまうという可能性が考えられる。そこで本研究は、変異型のメタロチオネインが細胞増殖に与える影響を検討することによって、エクソン3領域における塩基変異が細胞機能に与える影響を明らかにすることを目的とした。まず、マウス肝由来のメタロチオネイン次損細胞中でのこれら変異メタロチオネインの発現を検討したが、その発現量は極端に少なかった。そこで、遺伝子導入効率の良いヒト培養細胞を用いることにした。まず、siRNA法を用いてヒト由来細胞中のメタロチオネイン-II(ヒト細胞中の主要分子種)のノックダウンを試みた。様々な検討の結果、メタロチオネイン-IIの通常発現レベルが低下しているだけでなくカドミウムや亜鉛による誘導も認められないノックダウン細胞を作成することに成功した。本細胞はカドミウムに対して高に感受性を示し、ここに正常なメタロチオネイン遺伝子を導入してもこの感受性は回復しないことから、siRNAが効率良く機能してメタロチオネインmRNAの分解が生じていると考えられる。また、塩基配列を改変し(アミノ酸配列は正常)、この細胞中に導入してもsiRNAによって認識されないメタロチオネイン-II遺伝子の作成にも成功した。

Defensive proteins that are responsible for the toxicity of the virus are known to be present in the body. We are looking forward to seeing the diversity of the genetic diversity of genetic diversity. The first part of the article is about the difference between the two parts. The existence rate of multiple types is estimated, and the result is accidental. There are changes in the foundation of the world and the growth of adults in the world. There are changes in the reason for the individual to be born, and there is a possibility of death before being born. The purpose of this study is to investigate the effects of heteromorphic factors on cell proliferation and cell function. The occurrence of the disease in the sub-damaged cells was investigated and the occurrence of the disease was extremely low. The cells were cultured in vitro with high efficiency of gene transfer. The siRNA method was used to detect the presence of a protein in a cell derived from a major molecular species, i.e., protein II. The results of the investigation, the normal occurrence of the disease, and the successful production of the disease. This cell has the ability to respond to high levels of mRNA expression, to respond to normal levels of mRNA expression, to respond to high levels of mRNA expression, and to respond to high levels of mRNA expression. We successfully introduced siRNA into these cells, and we successfully produced the siRNA gene.