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シスプラチン耐性に関与するヒト細胞内因子の酵母を用いた検索

使用酵母寻找与顺铂耐药相关的人类细胞内因子

基本信息

批准号：
11140208
负责人：
永沼章
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

新しいシスプラチン耐性因子を同定するために,遺伝子ライブラリー中からシスプラチン耐性に関与する遺伝子の同定を試みた。まず,2μm系ハイコピープラスミドYEp13をベクターとする酵母ゲノムDNAライブラリーを酢酸リチウム法により親株(W303B)に導入し,導入遺伝子を高発現する形質転換体(約2.4×104個)を得た。次に,この形質転換体を親株が成育できない濃度のシスプラチンを含む寒天培地で培養し,本条件下で生育してきた酵母クローン中のプラスミドについて解析を行った。その結果,高発現することによって酵母にシスプラチン耐性を与える遺伝子としてCRP1およびCRP2を見いだすことに成功した。両遺伝子は,出芽酵母ゲノム中に存在するORFの中で互いに最も相同性の高い遺伝子であり,これらの遺伝子のコードする蛋白質中には塩基性領域ロイシンジッパー(bZIP)モチーフが存在する。両遺伝子は,出芽酵母の多剤耐性に関与する転写因子として同定されているYAP1に対しても比較的高い相同性を有することから,CRP1,CRP2およびYAPlを高発現する酵母のシスプラチン以外の薬毒物に対する交叉耐性を調べたところ,CRP1およびCRP2導入酵母はメタンスルホン酸メチルおよびマイトマイシンCに対しても交叉耐性を示したが,YAP1導入酵母が耐性を示す過酸化水素およびカドミウムに対しては耐性を示さなかった。また、YAP1導入酵母はCRPlおよびCRP2導入酵母が耐性を示すシスプラチンおよびマイトマイシンCに対して耐性を示さず,CRPlおよびCRP2が共にYAP1とは異なる機構で薬剤耐性に関与している可能性が示唆された。

The relationship between the tolerance factor and the gene tolerance factor is studied. The 2 μm yeast was introduced into the parent strain (W303B) by DNA sequencing, and the transformed plasmid (about 2.4×104) was highly expressed. In addition, the quality of the mutant, the parent plant, the growth of the mutant, the concentration of the mutant, the culture of the mutant in cold weather, and the analysis of the mutant in the yeast culture under these conditions. As a result, high levels of yeast resistance and CRP1 and CRP2 resistance were observed. The most common gene in the genome of budding yeast exists in the ORF, and the most common gene in the genome of budding yeast exists in the basic domain (bZIP). YAP1,CRP1,CRP2, and YAP1 are highly expressed. Yeast species other than YAP1, CRP1,CRP2, and YAP1 are highly expressed. Yeast species other than YAP1, CRP1, CRP 2, and YAP1 are highly expressed. YAP1 introduced into the yeast to show tolerance to excessive acidification of the water element and to show tolerance to the enzyme. YAP1 introduced into yeast CRP1 and CRP2 introduced into yeast resistance, CRP1 and CRP2 introduced into yeast resistance, CRP1 and CRP2 introduced into yeast resistance, CRP1 and CRP2 introduced into yeast resistance.