siRNAによる遺伝子ノックダウン法を利用したメチル水銀感受性決定遺伝子の検索

使用siRNA基因敲除法寻找决定甲基汞敏感性的基因

基本信息

批准号：
17659033
负责人：
永沼章
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

メチル水銀毒性の発現機構は不明のままであり,解明のための糸口さえほとんど得られていない。近年、siRNAを用いた遺伝子ノックダウン法が飛躍的な発展を遂げているが、最近になって約30,000といわれているヒト遺伝子の中で機能の分かっている約8,500の遺伝子を一つずつノックダウンするという画期的な応用例が報告された。そこで本研究では、メチル水銀毒性の分子メカニズム解明を目指し、この最新の報告で用いられたsiRNAライブラリーを利用して、欠損することによってメチル水銀感受性に影響を与えるヒト遺伝子群の同定を試みた。まず、様々な条件下での検討により、至適検索条件を確立した。その方法用いて、ノックダウンによってヒト胎児腎由来培養細胞(HEK293細胞)のメチル水銀感受性に影響を与える遺伝子群を検索した結果、ornithine aminotransferase、chemokine ligand 2、transglutaminase4、glutamate receptor metabotropic6、regulator of G protein signaling1、TBP-associated factor RNA polymerase II、 enolase 2およびphosphoenolpyruvate carboxykinase 1の8種の遺伝子が同定された。この中でenolase 2およびphosphoenolpyruvate carboxykinase 1は共にピルビン酸合成に関わる酵素であることから、ピルビン酸濃度の変動がメチル水銀毒性に影響を与える可能性が考えられた。そこで、ピルビン酸の培地中への添加がメチル水銀毒性に与える影響をヒト神経芽腫細胞を用いて検討したところ、ピルビン酸がメチル水銀毒性を顕著に増強させることが初めて明らかとなった。

甲基质毒性发育的机制仍然未知，几乎没有线索可以阐明它。近年来，使用siRNA的基因敲低方法正在经历戏剧性的发展，但是最近，据报道，在大约30,000个人类基因中，大约有8500个具有已知功能的基因将大约8,500个基因击倒了一个。因此，在这项研究中，我们旨在使用本报告中使用的siRNA库来阐明甲基信毒性的分子机制，以识别影响甲基汞敏感性通过缺失而产生的人类基因。首先，在各种条件下通过考虑建立了最佳搜索条件。 Using this method, we searched for a group of genes that affect the methylmercury sensitivity of human fetal kidney-derived cultured cells (HEK293 cells) by knockdown, and eight genes were identified: ornithine aminotransferase, chemokine ligand 2, transglutaminase4, glutamate receptor metabotropic6, regulator of G protein signaling1, TBP-associated factor RNA聚合酶II，烯醇酶2和磷酸丙酮酸羧基酶1。在其中，酰基烷酶2和磷酸烯醇丙酮酸羧化酶1都是丙酮酸合成的酶，并且认为丙酮酸浓度的波动可能会影响甲基汞的毒性。因此，当人类神经细胞细胞研究丙酮酸对培养基对甲基汞毒性的影响时，首次揭示了丙酮酸显着增强甲基汞毒性的作用。