siRNAによる遺伝子ノックダウン法を利用したメチル水銀感受性決定遺伝子の検索

使用siRNA基因敲除法寻找决定甲基汞敏感性的基因

• 批准号: 17659033
• 负责人: 永沼 章
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659033/
• 关键词: メチル水銀毒性; スクリーニング; siRNA; ライブラリー; ヒト培養細胞; 遺伝子ノックダウン

メチル水銀毒性の発現機構は不明のままであり,解明のための糸口さえほとんど得られていない。近年、siRNAを用いた遺伝子ノックダウン法が飛躍的な発展を遂げているが、最近になって約30,000といわれているヒト遺伝子の中で機能の分かっている約8,500の遺伝子を一つずつノックダウンするという画期的な応用例が報告された。そこで本研究では、メチル水銀毒性の分子メカニズム解明を目指し、この最新の報告で用いられたsiRNAライブラリーを利用して、欠損することによってメチル水銀感受性に影響を与えるヒト遺伝子群の同定を試みた。まず、様々な条件下での検討により、至適検索条件を確立した。その方法用いて、ノックダウンによってヒト胎児腎由来培養細胞(HEK293細胞)のメチル水銀感受性に影響を与える遺伝子群を検索した結果、ornithine aminotransferase、chemokine ligand 2、transglutaminase4、glutamate receptor metabotropic6、regulator of G protein signaling1、TBP-associated factor RNA polymerase II、 enolase 2およびphosphoenolpyruvate carboxykinase 1の8種の遺伝子が同定された。この中でenolase 2およびphosphoenolpyruvate carboxykinase 1は共にピルビン酸合成に関わる酵素であることから、ピルビン酸濃度の変動がメチル水銀毒性に影響を与える可能性が考えられた。そこで、ピルビン酸の培地中への添加がメチル水銀毒性に与える影響をヒト神経芽腫細胞を用いて検討したところ、ピルビン酸がメチル水銀毒性を顕著に増強させることが初めて明らかとなった。

Youdaoplaceholder0 メチ mercury toxicity <s:1> the institution that caused it is メチ unknown ままであ ままであ, explained ため さえほとん the itokuchi さえほとん な られて. In recent years, siRNA を with い た posthumous son 伝 ノ ッ ク ダ ウ ン method が leap な 発 exhibition を hence げ て い る が, recently に な っ て about 30000 と い わ れ て い る ヒ ト heritage 伝 child の で function の points か っ て い る about 8500 の heritage 伝 son を a つ ず つ ノ ッ ク ダ ウ ン す る と い う painting period な が 応 cases report さ れ た. そ こ で this study で は, メ チ ル mercury toxicity の molecular メ カ ニ ズ ム interpret を refers し, こ の で の report with latest い ら れ た siRNA ラ イ ブ ラ リ ー を using し て, owe damage す る こ と に よ っ て メ チ ル mercury sensitivity に influence を and え る ヒ ト heritage 伝 subgroup の with fixed を try み た. Under the conditions of まず and 々な, で <s:1> 検 seek によ, and to the most suitable 検 conditions を establish た. そ の way with い て, ノ ッ ク ダ ウ ン に よ っ て ヒ ト tire where renal origin culture cell (HEK293 cells) の メ チ ル mercury sensitivity に influence を and え る heritage 伝 subgroup を 検 cable し た results, ornithine aminotransferase, chemokine ligand 2. transglutaminase4, glutamate receptor metabotropic6, regulator of G protein signaling1, TPP-associated factor RNA polymerase II, enolase 2およびphosphoenolpyruvate carboxykinase 1 and eight other intangible cultural heritages 伝 subtypes が co-determined された. In こ の で enolase 2 お よ び phosphoenolpyruvate carboxykinase 1 は altogether に ピ ル ビ ン acid synthesis に masato わ る enzyme で あ る こ と か ら, ピ ル ビ ン acid concentration の - move が メ チ ル mercury toxicity に influence を and え る possibility が exam え ら れ た. の そ こ で, ピ ル ビ ン acid in petty へ の add が メ チ ル に mercury toxicity and え る influence を ヒ ト god 経 buds swell cells を using い て beg し 検 た と こ ろ, ピ ル ビ ン acid が メ チ ル mercury toxicity を 顕 the に raised strong さ せ る こ と が early め て Ming ら か と な っ た.