胚性幹細胞由来心筋細胞特異的表面抗原の同定とそれを用いた心筋細胞単離法の開発

胚胎干细胞源性心肌细胞特异性表面抗原的鉴定及利用其分离心肌细胞方法的开发

• 批准号: 16659206
• 负责人: 松原 弘明
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659206/
• 关键词: 胚性幹細胞; 心筋分化; 表面マーカー; 心筋特異的プロモーター; 緑色蛍光蛋白; 膜タンパク; マススペクトロメトリー; ファージディスプレイ

本研究では、マウス胚性幹細胞(ES細胞)を用いてES細胞由来心筋分化細胞に特異的に発現する表面膜分子の同定と、それを用いた心筋分化細胞の単離法の開発を目的として、遺伝子工学的、あるいは蛋白工学的手法を用いて検討を行ってきた。心筋特異的プロモーターにより緑色蛍光蛋白(EGFP)発現が制御される遺伝子を導入したES細胞を用い、FACSにてEGFP発現心筋細胞を単離し、検討を行っている。マウスES細胞においても、その心筋分化効率は数%と低く、FACSによる単離を経て解析に充分な量のPoly(A)+RNAや膜タンパクといったサンプルを調整することは困難であったが、培養条件、ソート条件の最適化などをまず行い、10^6個以上のEGFP陽性心筋細胞を95%以上の純度で単離する方法を確立した。ここで得られた細胞よりTriton X-114を用いた難溶性タンパクの相分離による回収、タンパク吸着レジンによる脱塩/バッファー交換後、可溶能の高いサンプルバッファーにて溶出し、膜タンパク分画を得、2次元電気泳動を行い、EGFP陰性細胞より得たサンプルとの比較により、心筋分化細胞に特異的に発現する数個のスポツトを同定し、現在、マススペクトロメトリーにて解析中である。またランダムな7アミノ酸よりなるペプチドライブラリーを発現するファージライブラリーを用いて、EGFP陰性非心筋細胞群に対して陰性選択後、EGFP陽性心筋細胞群に対して2回の陽性選択バイオパニングを行い、4種の心筋分化細胞に特異的に結合するアミノ酸配列を同定した。現在、このペプチドを固相化して心筋分化細胞を単離する方法の開発と、これらペプチドに結合する心筋分化細胞表面分子の同定を進めている。

In this study, fetal ES cells were used to differentiate the surface membrane molecules of embryonic ES cells. In this study, we used the method of cell differentiation to differentiate the surface membrane molecules of the cells. In this study, we used the method of cell differentiation to differentiate the surface membrane molecules of the cells. The color light protein (EGFP) that is special in your heart can be used in the ES cell, the FACS cell will be separated from the cell, and the cell will be separated. The percentage of heart muscle differentiation in ES cells is low, FACS is low, FACS is isolated, and the analysis is full. Poly (A) + RNA membranes

项目成果

血管再生医療の実施と展望-骨髄系体細胞移植を用いた末梢性血管疾患・狭心症への血管新生医療-

血管再生医学的实施与展望-利用骨髓体细胞移植治疗周围血管疾病和心绞痛的血管生成医学-

• 发表时间: 2004
• 作者: 松原 弘明

Carbon dioxide-rich water bathing enhances collateral blood flow in ischemic hindlimb via mobilization of endothelial progenitor cells and activation of NO-cGMP system

• DOI: 10.1161/01.cir.0000159329.40098.66
• 发表时间: 2005-03-29
• 期刊: CIRCULATION
• 影响因子: 37.8
• 作者: Irie, H;Tatsumi, T;Matsubara, H
• 通讯作者: Matsubara, H

Very low frequency power of heart rate variability is a powerful predictor of clinical prognosis in patients with congestive heart failure

• DOI: 10.1253/circj.68.343
• 发表时间: 2004-04-01
• 期刊: CIRCULATION JOURNAL
• 影响因子: 3.3
• 作者: Hadase, M;Azuma, A;Matsubara, H
• 通讯作者: Matsubara, H

Cytokine-induced nitric oxide inhibits mitochondrial energy production and induces myocardial dysfunction in endotoxin-treated rat hearts

• DOI: 10.1016/j.yjmcc.2004.06.014
• 发表时间: 2004-09-01
• 期刊: JOURNAL OF MOLECULAR AND CELLULAR CARDIOLOGY
• 影响因子: 5
• 作者: Tatsumi, T;Akashi, K;Matsubara, H
• 通讯作者: Matsubara, H

Aldosterone directly induces myocyte apoptosis through calcineurin-dependent pathways

• DOI: 10.1016/j.cardfail.2004.08.105
• 发表时间: 2004-10
• 期刊: Journal of Cardiac Failure
• 影响因子: 6
• 作者: Mano Akiko;Tatsumi Tetsuya;T. Mitsuo;Nishikawa Susumu;Yamanaka Satoshi;Shiraishi Jun;Keira Natsuya;Matoba Satoaki;Kobara Miyuki;Matsubara Hiroaki