マルチプルアミンセンサの開発

多种胺传感器的研制

• 批准号: 17651072
• 负责人: 前山 一隆
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17651072/
• 关键词: アミンオキシダーゼ; ヒスタミン; マイクロセンサ; 基質チャネル; 酵素電極; アンペロメトリー; トパキノン; カテコールアミン; トパキノ

コリネ型土壌細菌Arthrobacter globiformis由来のヒスタミンオキシダーゼ(HAO)はトパキノンを補酵素とする銅含有酵素ファミリーの一つで、ヒスタミンを基質とする。我々はこれまでに本酵素を固定化し西洋ワサビペルオキシダーゼを含むオスミウムゲルを電子媒体として、電気化学的にヒスタミンを検出するヒスタミンセンサーを考案、実用化させできた。HAOはすでにクローニング済みで、さらにHis-tag付のHAOを得ている。大腸菌から発現精製した本酵素を用いて以下の検討を行った。1)HAOの生化学的性質の検討と基質チャネル改変アミンオキシダーゼの検討:HPLC-ECD法を用いてHAOの基質特異性を検討した結果、ヒスタミン、代謝物であるN^τ-メチルヒスタミン、生体内には存在しないN^π-メチルヒスタミンに対し活性比はそれぞれ100、75、117%であった。大腸菌から発現精製した本酵素の結晶化を進めている。また愛媛大学総合科学研究支援センターに設置されている無細胞系タンパク質自動合成装置を用いて変異酵素の作成とスクリーニングを進めている。2)ヒスタミン、メチルヒスタミンの測定系の開発:ヒスタミン(HA)とその代謝物であるN^τ-メチルヒスタミン(N^τ-MHA)をo-フタルアルデヒド、亜硫酸イオンと反応させプレカラム誘導体化によるHPLC-電気化学的(ECD)検出法を新規に開発し、生体サンプルへの応用を検討した。HA、N^τ-MHAさらに内部標準としてN^π-メチルヒスタミン(N^π-MHA)をo-フタルアルデヒド、亜硫酸ナトリウムとアルカリ条件下で反応させ、反応物をHPLC(ODSカラム)にて分離溶出し、電気化学検出法にて検出した。HA、N^π-MHA、N^τ-MHAはそれぞれ14.2、16.5、23.3分に溶出され検出感度は1pmolであった。マウス脳HA、N^τ-MHA含量はそれぞれ0.60、0.48nmol/gであった。

The bacterium Arthrobacter globiformis is derived from the enzyme matrix (HAO) and contains the enzyme matrix. The enzyme was immobilized in the presence of an electronic medium and an electrochemical medium. The HAO is the first to be released from the market. Escherichia coli production and purification of this enzyme using the following methods 1) Study on the biochemical properties of HAO and matrix change:HPLC-ECD method was used to study the matrix specificity of HAO. The results showed that the activity ratio of HAO was 100, 75 and 117%. The crystallization of refined enzymes appears in coliform bacteria and progresses. Ehime University Integrated Scientific Research Support Center for Cell Line Free Mass Synthesis Equipment for the Production of Heteroenzymes 2) Development of the determination system for the chemical and biological components: development of a new HPLC-electrochemical (ECD) separation method for the chemical and biological components of the metabolites of HA and MHA. HA, N^τ-MHA, N^π-MHA, O-4, N^π-MHA, N^π-MHA, N ^π-MHA HA, N^π-MHA, N^τ-MHA were dissolved at 14.2, 16.5, 23.3 min, and the sensitivity was 1pmol. The contents of HA and N^τ-MHA were 0.60 and 0.48 nmol/g respectively.

项目成果

Nuclear receptors as targets for drug development : peroxisome proliferator-activatedf receptor gamma in mast cells :

核受体作为药物开发的靶点：肥大细胞中的过氧化物酶体增殖物激活受体γ：

• 发表时间: 2005
• 期刊: J pharmacol Sci 97(2)
• 作者: Syuji Fujii;Hideto Minami;Masayoshi Okubo;Y.Konishi;小西康裕;前山一隆;Ogasawara M;Yoshida M.;Kitamura Y.;Shibata N;Liu S.;Liu S.;Tsunooka N.;Liu S.;Maeyama K.
• 通讯作者: Maeyama K.

Localization and changes of diamine oxidase during cardiopulmonary bypass in rabbits.

• DOI: 10.1016/j.jss.2005.10.004
• 发表时间: 2006-03
• 期刊: The Journal of surgical research
• 作者: N. Tsunooka;K. Maeyama;H. Nakagawa;T. Doi;Atsushi Horiuchi;K. Miyauchi;Yuji Watanabe;H. Imagawa;K. Kawachi

The contribution of mast cells to the late-phase of allergic asthma in rats

• DOI: 10.1007/s00011-005-1346-9
• 发表时间: 2005-05-01
• 期刊: INFLAMMATION RESEARCH
• 影响因子: 6.7
• 作者: Liu, S;Chihara, K;Maeyama, K
• 通讯作者: Maeyama, K

マスト細胞欠損動物から見えてきたもの

我们从肥大细胞缺陷动物身上学到了什么

• 发表时间: 2006
• 期刊: 愛媛医学 25
• 作者: Syuji Fujii;Hideto Minami;Masayoshi Okubo;Y.Konishi;小西康裕;前山一隆
• 通讯作者: 前山一隆

Direct effects of nitric oxide on histamine release from rat enterochromaffin-like cells.

• DOI: 10.1016/j.ejphar.2006.01.058
• 发表时间: 2006-03
• 期刊: European journal of pharmacology
• 影响因子: 5
• 作者: Naozumi Shibata;H. Matsui;T. Yokota;B. Matsuura;K. Maeyama;M. Onji