ラフトを定量的に解析する方法の開発と応用

筏定量分析方法的开发及应用

• 批准号: 17659053
• 负责人: 藤本 豊士
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659053/
• 关键词: ラフト; 膜脂質; ミクロドメイン; 点過程解析; 凍結割断レプリカ; 急速凍結法; 免疫電顕; 細胞膜; フリーズフラクチャー; 定量; コレステロール

膜脂質は膜構造のベースとなるだけでなく,ミクロドメインの形成,シグナル伝達など多様な機能を持つ.しかし脂質分子は通常の化学固定剤とは反応せず,また仮に反応したとしても時間がかかるため,脂質分子の正確な超微局在を従来の免疫電顕法で捉えることはほとんど不可能である.我々はSDS処理凍結割断レプリカ標識法(SDS-FRL)を基礎技術として用い,膜脂質の局在をnmレベルで定量的に捉えることを目指している.本研究では脂質ラフトのマーカーとして用いられるGM1について下記の結果を得た.正常マウス線維芽細胞ではGM1は半径47nm程度のクラスターを形成して分布していた.このことはRipleyのK関数を用いた点過程解析によって確かめられた.メチルβシクロデキストリンによるコレステロール除去,あるいは氷温,30分の浸漬により,クラスター形成の程度は顕著に低下し,ランダムに分布する領域がしたが,クラスター形成領域も残存した.またこれらの処理により,GM1の標識密度は有意に増加し,最近隣距離も増大した.最近隣距離は無処理群では標識密度によってほとんど変化しなかったが,コレステロール除去群,低温処理群では標識密度が大きくなると減少した.これらの結果は無処理細胞ではGM1がクラスターを作り,2つの処理により分散傾向を示すと考えることによって説明できる.モデル実験の結果,レプリカ上に固定される膜脂質の割合(保持効率)および標識されるGM1の割合(標識効率)はそれぞれ82.6%,19.4-27.7%であり,細胞膜に存在する脂質を非常に高い効率で補足していることが確かめられた.この方法は他の膜脂質にも応用可能であり,今後に多くの展開が期待できる.

Membrane lipid は membrane structure の ベ ー ス と な る だ け で な く, ミ ク ロ ド メ イ ン の formation, シ グ ナ ル 伝 da な ど others more な function を つ. し か し lipid molecule chemical は usually の tonic と は anti 応 せ ず, ま た 仮 に anti 応 し た と し て も time が か か る た め, lipid molecules の right な superfine bureau in を 従 to の immune 顕 method で catch え る こ と は Youdaoplaceholder0 である cannot possibly である. I 々 は SDS 処 Richard freeze cut レ プ リ カ identification method (SDS - FRL) based technology と を し て in い, membrane lipid の bureau in を nm レ ベ ル で quantitative に catch え る こ と を refers し て い る. This study で は lipid ラ フ ト の マ ー カ ー と し て in い ら れ る this に つ い remember の results under て を た. Normal マ ウ ス line d bud cells で は this は radius 47 degree of nm の ク ラ ス タ ー を form し て distribution し て い た. こ の こ と は Ripley の number K masato を with い た point process analytical に よ っ て か indeed め ら れ た. メ チ ル beta シ ク ロ デ キ ス ト リ ン に よ る コ レ ス テ ロ ー ル eliminate, あ る い は 氷 temperature, 30 points の dipping に よ り, ク ラ ス タ ー form の degree は 顕 low に し, ラ ン ダ ム に distribution す る field が し た が, ク ラ ス タ ー form field も residual し た. ま た こ れ ら の 処 Richard に よ り, this の は intends to identify density に raised し, 隣 distance も recently raised large し た. Recently は 隣 distance without 処 principle of で は logo density に よ っ て ほ と ん ど variations change し な か っ た が, コ レ ス テ ロ ー ル remove group, low temperature 処 principle of で は logo big density が き く な る と reduce し た. こ れ ら の results は no 処 Richard cells で は this が ク ラ ス タ ー を り, 2 つ の 処 Richard に よ り decentralized tendency を shown す と exam え る こ と に よ っ て said Ming で き る. モ デ ル be 験 の results, レ プ リ カ に さ fixed on れ る membrane lipid の cut in (a) keep working rate お よ び logo さ れ る this の cut in (a) logo sharper rate は そ れ ぞ れ 82.6%, 19.4 27.7% で あ り, cell membrane に exist す る lipid を に い very high working rate で complement し て い る こ と が か indeed め ら れ た. こ の The possible uses of <s:1> other <s:1> membrane lipids に 応 応 may be であ る, and in the future, に more く will be developed が expectations で る る.

项目成果

組織細胞化学2005(超薄切片を用いた免疫電顕法)

组织细胞化学 2005（使用超薄切片的免疫电子显微镜）

• 发表时间: 2005
• 作者: 藤田秋一;藤本豊士
• 通讯作者: 藤本豊士

Anti-calreticulin Antibody Binds to a Membrane Protein in Caveolae

• DOI: 10.1267/ahc.38.43
• 发表时间: 2005
• 期刊: Acta Histochemica Et Cytochemica
• 影响因子: 2.4
• 作者: R. Nomura;T. Aoki;H. Hagiwara;T. Senda;T. Fujimoto

Differential expression of caveolin-3 in mouse smooth muscle cells in vivo.

Caveolin-3在小鼠平滑肌细胞体内的差异表达。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Cell Tissue Res. (In press)
• 作者: Kogo;H.;S.Ito;Y.Moritoki;H.Kurahashi;T.Fujimoto
• 通讯作者: T.Fujimoto

染色・バイオイメージング実験ハンドブック

染色/生物成像实验手册

• 发表时间: 2006
• 作者: 藤田秋一;藤本豊士
• 通讯作者: 藤本豊士

分子の局在を見る (3) 凍結レプリカ標識法による膜脂質の分布解析

观察分子的定位（3）利用冷冻复制标记法进行膜脂质分布分析

• 发表时间: 2007
• 期刊: 細胞工学 26(印刷中)
• 作者: 藤田秋一;藤本豊士
• 通讯作者: 藤本豊士