がん細胞の増殖,浸潤機構と脂質ドメイン

癌细胞增殖、侵袭机制与脂质结构域

• 批准号: 20013018
• 负责人: 藤本 豊士
• 金额: $ 9.41万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20013018/
• 关键词: イノシトール燐脂質; カベオラ; コーテッドピット; カルシウム; アクチン; ガングリオシド; ラフト

膜脂質の正確な局在をナノメートルレベルで決定することは膜生物学だけでなく,細胞増殖,細胞運動など種々の現象を分子レベルで理解するために重要である。しかし,通常の化学固定剤は脂質に作用せず,また様々な刺激が局在変化を惹起する可能性があるため,膜脂質に関する理解は進んで来なかった。我々は今回の研究により急速凍結と凍結割断レプリカ標識法を組み合わせることにより,膜脂質を物理的に固定し,局在を決定する方法を開発した。その方法を用いて,細胞骨格,小胞輸送などの制御に重要な役割を果たすフォスファチジルイノシトール4,5二燐酸(PIP2)の挙動を明らかにした。PIP2は線維芽細胞の平坦な膜領域ではごく弱いクラスターを形成するのみであったが,カベオラ開口部,コーテッドピット辺縁部には高度な集中を示した。Angiotensin II刺激後,平坦な膜領域では10秒でPIP2標識密度は最低レベルに低下し,2分までに徐々に回復した。カベオラのPIP2は10秒では変化せず,40秒で最も低下し,2分で静止期レベルに回復した。コーテッドピットは10秒でやや減少したが,その程度は平坦な膜領域に比較してごく軽度であった。PIP2の集合は,カベオラではカベオリンに,コーテッドピットではepsin, dynaminなどのエンドサイトーシス関連蛋白質に結合することによって生じると考えられる。今回の結果は,3つの異なる挙動を示すPIP2のプールが形質膜に存在することを明確に示した。本研究で開発した方法は高い空間解像度を持ち,任意の細胞に応用することができる。動物体内の細胞など,多くの実験系への応用が考えられ、癌細胞の挙動解析にも重要なツールとなる。

The correct position of membrane lipids is important in determining membrane biology, cell proliferation, cell movement, and molecular understanding. In general, chemical fixation agents act on lipids and stimulate the development of membrane lipids. In this study, we developed a method for determining the physical fixation of membrane lipids. The method is applied to the control of cellular transport and the regulation of the activity of 4,5-diphosphate (PIP2). PIP2: The flat membrane field of the linear bud cell is not weak, the opening part is not strong, and the concentration part is not strong. After Angiotoxin II stimulation, PIP2 marker density decreased from the lowest level in 10 seconds to the lowest level in 2 minutes. The PIP is 10 seconds, 40 seconds, and 2 minutes. 10 seconds to reduce the amount of film in the field. PIP2's aggregation is reversed, and the protein content of PIP2 is reversed. The results of this study clearly indicate the existence of PIP2 in the plasma membrane. The method developed in this study maintains high spatial resolution and is used in arbitrary cellular applications. In animals, cell dynamics are important for the analysis of cancer cell dynamics.

项目成果

凍結割断レプリカ法標識法による膜脂質のナノ局在解析

使用冷冻断裂复制标记法对膜脂进行纳米定位分析

• 发表时间: 2008
• 作者: 藤本豊士;藤田秋一;程晶磊
• 通讯作者: 程晶磊

膜脂質分子をナノレベルで可視化する

在纳米水平上可视化膜脂质分子

• 发表时间: 2009
• 期刊: 顕微鏡 44
• 作者: 藤田秋一;藤本豊士
• 通讯作者: 藤本豊士

電子顕微鏡で読み解く生命のなぞ

用电子显微镜了解生命的奥秘

• 发表时间: 2008
• 作者: 藤本豊士;山本章嗣
• 通讯作者: 山本章嗣

A distinct pool of phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate in caveolae revealed by a nanoscale labeling technique

• DOI: 10.1073/pnas.0900216106
• 发表时间: 2009-06-09
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Fujita, Akikazu;Cheng, Jinglei;Fujimoto, Toyoshi
• 通讯作者: Fujimoto, Toyoshi

Segretation of GM 1 and GM 3 clusters in the cell membrane depends on the intact actin cytoskeleton

细胞膜中 GM 1 和 GM 3 簇的分离取决于完整的肌动蛋白细胞骨架

• 发表时间: 2009
• 期刊: Biochim. Biophys. Acta (印刷中)
• 作者: Fujita;A.;Cheng;J.;Fujimoto;T.
• 通讯作者: T.