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イノシトール燐脂質分布の定量的解析

肌醇磷脂分布的定量分析

基本信息

批准号：
18050012
负责人：
藤本豊士
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

ホスファチジルイノシトール(PI)のイノシトール基の3,4,5位が燐酸化されることによって生じるイノシトール燐脂質(PIs)は,細胞内小胞輸送やシグナル伝達に重要な役割を果たすことが知られている.PIsの膜内二次元分布をナノスケールで解析し,細胞内超微構造との関連を明らかにすることはPIsの生理的機能をさらに詳細に理解するために重要である.従来の方法では微細な脂質局在を解明することが原理的に困難であると考えられるため,我々は急速凍結した細胞膜を白金・カーボン薄膜で物理的に固定する凍結割断レプリカを用いてPIsの超微局在を可視化し,定量的に解析する方法を創出した.既に昨年度までの研究で特異性,標識効率性などが十分に確保されたPI(4,5)P2に対するプローブ(GST-PH)を用いて,急速凍結して得た培養細胞のレプリカを標識,解析した.その結果,平坦な細胞膜のPI(4,5)P2は弱いクラスターを形成して存在すること,上記のクラスターはコレステロール抽出でやや低下するが,アクチン脱重合でほぼ完璧に消滅すること,PI(4,5)P2は特にカベオラ周囲に顕著に集中すること,細胞内カルシウム上昇によって標識は激減するが,生理的リガンドによる刺激ではカベオラ周囲のPI(4,5)P2が保たれる場合が多いことなどが明らかとなった.これらの結果は生細胞でのPI(4,5)P2の分布をナノスケールで初めて明らかにしたものであり,カベオラが平坦な細胞膜部分とは異なる特殊な領域を形成することを示した点で重要である.

Phosphorylation at positions 3, 4, and 5 of the PIs is an important factor in intracellular transport and expression of PIs. The analysis of the two-dimensional distribution of PIs in the membrane is based on the analysis of phosphorylation at positions 3, 4, and 5 of PIs. The relationship between intracellular ultrastructure and physiological function of PIs is clearly understood. The present method is difficult to understand the principle of micro-lipid structure, but it is difficult to understand the principle of micro-lipid structure. It is difficult to understand the principle of micro-lipid structure. It is difficult to understand the principle of micro-lipid structure. It is difficult to understand the principle of micro-lipid structure. In the past year, the specificity of the study, the identification rate, and the use of PI(4,5)P2 in the culture of cells (GST-PH) were analyzed. As a result, PI(4,5)P2 of flat cell membrane is weakly formed and exists, and PI (4,5) P2 of flat cell membrane is weakly formed and exists, and PI(4,5) P2 of flat cell membrane is strongly formed and exists, and PI(4,5)P2 of flat cell membrane is strongly formed and exists, The physiological stimulation is not the same as PI(4,5)P2. As a result, PI(4,5)P2 distribution in living cells is important for the formation of flat cell membrane parts and special areas.