細胞内脂質滴の機能に関する細胞生物学的研究

细胞内脂滴功能的细胞生物学研究

• 批准号: 05F05486
• 负责人: 藤本 豊士
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05F05486/
• 关键词: イノシトール燐脂質; 凍結割断; 急速凍結; 脂質滴; ApoB; TIP47; コレステロール; ADRP; オートファジー; PI3キナーゼ; カベオリン; 免疫電顕

脂質滴および細胞内脂質動態についての検索を行い,以下の成果を得た.1)肝細胞由来株でApolipoprotein B100(ApoB)が脂質滴周囲に貯留する構造(ApoB-crescent)について超微形態学,組織化学の手法で解析した.その結果,ApoB-crescentが脂質滴に扁平なER槽(以下,扁平槽)が融合した構造であること,ApoB,ER可溶性シャペロン,ER膜蛋白質,分泌蛋白質が扁平槽内にあること,扁平槽はグルコース6燐酸活性陽性であること,扁平槽の外側は単位膜構造を示すのに対し,内側(脂質滴側)には膜構造が見られないこと,さらに扁平槽がフィリピンで強染することなどを明らかにした,ApoB-crescentは脂質エステルがER膜の内部に蓄積する構造であり,脂質滴形成の中間段階と推測されてきた「脂質二重層に挟まれた脂質エステル蓄積」が動物細胞内で生じることが初めて明らかになった.2)イノシトール燐脂質(PIs)の一つであるPI3Pが細胞内小胞輸送に果たす役割について解析するため,急速凍結した細胞を白金・カーボン薄膜で物理的に固定する凍結割断レプリカを用い,定量的に解析する方法を創出した.8種類のPIsを等モル%含むリポソーム,プローブ中の1アミノ酸を置換した変異体,PI3キナーゼ欠損細胞などを用いた実験により標識の特異性は確かめられた.酵母細胞の凍結割断レプリカを標識して解析し,PI3Pが液胞膜などに多く,細胞膜,核膜,ミトコンドリア膜などには少ないことが明らかになった.

Lipid droplet および intracellular lipid dynamics に に た て <s:1> 検 the following を results を obtained た.1) hepatocyte origin line でApolipoprotein B100 (ApoB) が lipid drops weeks 囲 に retention す る structure (ApoB - crescent) に つ い て ultrastructural morphology, histochemical の gimmick で parsing し た. そ の results, ApoB - crescent が lipid drops に flat な ER tank (the following, flat slot) が fusion し た tectonic で あ る こ と, ApoB, ER soluble Sexual シ ャ ペ ロ ン, ER membrane proteins secreted protein が flat slot に あ る こ と, flat slot は グ ル コ ー ス 6 燐 acid active positive で あ る こ と, flat slot の lateral は 単 membrane structures を shown す の に し seaborne, medial lateral (lipid drops) に は membrane structure が see ら れ な い こ と, さ ら に flat slot が フ ィ リ ピ ン dye strong で す る こ と な ど を Ming ら か に し た, ApoB - crescent は lipid エ ス テ ル が ER membrane の internal に accumulation す る tectonic で あ り, lipid droplets の middle Duan Jie と speculation さ れ て き た "lipid bilayer に carry ま れ た lipid エ ス テ ル accumulation" で が animal cell raw じ る こ と が early め て Ming ら か に な っ た. 2) イ ノ シ ト ー ル 燐 lipid (PIs) の A つ で あ る PI3P が intracellular vesicular transport に fruit た す "cut に つ い て parsing す る た め, quick freezing し た cells を platinum, カ ー ボ ン film で physical に fixed す る freeze cut レ プ リ カ を い, quantitative analytical す に を る method makes し た. 8 kinds の PIs を etc モ ル % contain む リ ポ ソ ー ム, プ ロ ー ブ の 1 ア ミ ノ acid を replacement し た - variants, PI3 キ ナ ー ゼ owe damaged cells な ど を with い た be 験 に よ り logo の specificity は か indeed め ら れ た. Yeast cells の freeze cut レ プ リ カ を logo し て parsing し, PI3P が vacuole membrane な ど に く, cell membrane and nuclear membrane, ミ ト コ ン ド リ ア membrane な ど に は less な い こ と が Ming ら か に な っ た.

项目成果

免疫電子顕微鏡法

免疫电子显微镜

• 发表时间: 2006
• 作者: 藤本豊士;藤田秋一;程晶磊
• 通讯作者: 程晶磊

Cholesterol depletion induces autophagy

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2006.10.042
• 发表时间: 2006-12-08
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Cheng, Jinglei;Ohsaki, Yuki;Fujimoto, Toyoshi
• 通讯作者: Fujimoto, Toyoshi

Platelet-derived growth factor signals play critical roles in differentiation of longitudinal smooth muscle cells in mouse embryonic gut

• DOI: 10.1111/j.1365-2982.2007.01055.x
• 发表时间: 2008-05-01
• 期刊: NEUROGASTROENTEROLOGY AND MOTILITY
• 影响因子: 3.5
• 作者: Kurahashi, M.;Niwa, Y.;Torihashi, S.
• 通讯作者: Torihashi, S.

All-mans-retinol generated by rhodopsin photobleaching induces rapid recruitment of TIP47 to lipid droplets in the retinal pigment epithelium

视紫红质光漂白产生的全人类视黄醇诱导 TIP47 快速募集到视网膜色素上皮的脂滴中

• 发表时间: 2007
• 期刊: Invest.Ophthal.Vis.Sci 48
• 作者: Tsuild;E.;Fujita;A.;Ohsaki;Y.;Cheng;J.;Irie;T.;Yoshikawa;K.;Senoo;H.;Mishima;K.;Kitaoka;T.;Fujimoto;T.
• 通讯作者: T.

Gangliosides GM1 and GM3 in the living cell membrane form clusters susceptible to cholesterol depletion and chilling

• DOI: 10.1091/mbc.e07-01-0071
• 发表时间: 2007-06-01
• 期刊: MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL
• 影响因子: 3.3
• 作者: Fujita, Akikazu;Cheng, Jinglei;Fujimoto, Toyoshi
• 通讯作者: Fujimoto, Toyoshi