定量的可視化法による癌細胞でのラフト破綻の解析

使用定量可视化方法分析癌细胞筏破坏

基本信息

批准号：
17014042
负责人：
藤本豊士
金额：
$ 3.39万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17014042/
关键词：
癌ラフトガングリオシド定量 GM1 GM3 コレステロール

项目摘要

細胞膜にはスフィンゴ脂質,コレステロールなどで形成される脂質ラフトが存在すると仮定され,ラフトにはH-Ras, Srcなどシグナル伝達に係わる分子が集中すると考えられている.ラフトの破綻は細胞増殖制御の異常に直結すると予想される.しかしラフトは温度変化,プローブ結合などで容易に変動すると予想され,生きた細胞でのラフトの実体については多くの議論がある.我々は生きた細胞でのラフトの有無や諸性質を知り,シグナル伝達過程の異常との関係を検索するために急速凍結・凍結割断レプリカ標識法を用いた検索方法の開発と応用を目的として研究を進めている.今年度はラフトを構成する分子であるGM1,GM3について実験を行い,分布をRipleyのK関数などで解析して以下の結果を得た.1)マウス線維芽細胞では半径約50nmのクラスターを形成する領域が大半を占め,一個の細胞は全域で同一の分布パターンを示した.2)クラスターはGM1の分布密度にかかわらず存在した.3)コレステロールを減少させた細胞あるいは4℃で処理した細胞では,クラスター分布の領域は減少し,大半の細胞でランダムな分布を示す領域との混在が見られた.4)GM3もクラスター分布を示すが,GM1,GM3は共通のクラスターを形成する場合と,別々のクラスターを形成する場合があった.これらの結果は,GM1がクラスターを形成し,コレステロール依存性に変化する点でラフト説を支持する.一方,コレステロール減少や低温による変化がクラスターの解消ではなく,ランダム分布との混在をもたらすことを初めて明らかにした.

假定细胞膜中存在由鞘脂和胆固醇形成的脂质筏，并且H-RAS和筏子被认为会在信号传导中涉及的分子浓度，例如SRC。预计筏的塌陷有望直接导致细胞增殖控制异常。但是，由于温度变化和探针结合，预计筏会容易波动，并且关于活细胞中的筏子存在很多争论。我们正在学习筏在活细胞中的存在和特性，并正在进行研究，目的是使用快速的冻结/冷冻/冻结复制品标记方法来开发和应用搜索方法，以搜索信号过程中与异常的关系。今年，我们在GM1和GM3上进行了实验，组成筏的分子，并使用Ripley的K功能分析了分布，并获得了以下结果，并获得了以下结果：1）在小鼠成纤维细胞中，形成群集的区域，形成群集的半径约为50 nm英语。 2）存在簇，无论GM1的分布密度如何。 3）簇存在于胆固醇降低或在4°C下处理的细胞中，并且簇分布的区域降低，并发现具有随机分布的区域与大多数细胞中随机分布的区域混合。 4）GM3也表现出簇分布，但GM1和GM3有时会形成常见簇，有时会形成单独的簇。这些结果支持筏理论，因为GM1形成簇并依赖于胆固醇。另一方面，首次揭示了胆固醇降低或低温引起的变化导致随机分布的混合而不是解决簇。