ソノポレーション法によるinvivoコルチ器へのprestin遺伝子導入
声孔法将prestin基因导入体内Corti器官
基本信息
- 批准号:17659525
- 负责人:
- 金额:$ 2.11万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:2005
- 资助国家:日本
- 起止时间:2005 至 2006
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
目的:これまでのprestinを発現させた実験は、ポリフェクッション法にてCHO-K1やkidney cell lineなどの培養細胞に形質導入を行っている。ソノポレーション法は生体への影響やダメージが少なく、組織内に電極を進入させずに非侵襲的に目的部位に遺伝子導入が可能である。本研究ではコルチ器内の細胞に直接prestin遺伝子Presの形質導入を行い、prestinの発現を確認した。結果:1.Prestin遺伝子のコルチ器内感覚細胞・支持細胞への形質導入技術の確立gerbilより同定したprestin遺伝子(Pres)を、マイクロバブル(診断用超音波造影剤)を併用してソノポレーション法にて内耳に導入した。生後5日目(P5)から生後18日目(Pl8)までのC57BL/6Jマウスの頂回転より蝸牛を取り出した。prestin遺伝子とマイクロバブルを混和した後、混和した細胞外液に蝸牛を入れ超音波を照射した。2.蛍光顕微鏡・レーザー顕微鏡によるコルチ器内prestin発現細胞の形態学的解析prestin遺伝子の導入は、発現ベクターにGFP遺伝子を挿入しGFPによる蛍光シグナルをソノポレーションによる導入24-48時間後に確認した。蛍光顕微鏡・レーザー顕微鏡を用いて、prestin遺伝子導入細胞のコルチ器内のGFPの蛍光シグナルを確認したところ、三列の外有毛細胞、一列の内有毛細胞そして支持細胞の列に一致してGFPの蛍光が認められた。3.RT-PCR法によるprestin発現の解析ソノポレーションによる導入24-48時間後にコルチ器組織よりRNAを抽出し、gerbilのprestin遺伝子配列に特異的なオリゴプライマーを用い、reverse transcription-PCRによって導入prestinの発現を確認した。
Objective: To study the expression of prestin in cultured cells by CHO-K1 and kidney cell line. The method can be used to reduce the number of cells in the tissue and to introduce the cells into the non-invasive target sites. In this study, we confirmed the expression of prestin gene Pres directly in the cells. Results: 1. Establishment of gerbil gene transfer technique for prestin gene in sensory cells and supporting cells in the inner ear and application of gerbil gene transfer technique for prestin gene transfer. C57BL/6J prestin, prestin 2. Morphological analysis of prestin expression cells in vitro by optical microscopy The introduction and expression of prestin gene was confirmed after 24-48 hours of GFP induction. The GFP in the cells transfected with the prestin gene was identified by microscopy. Three rows of outer hairy cells and one row of inner hairy cells were identified by microscopy. 3.RT-PCR analysis of prestin expression 24-48 hours after introduction, RNA was extracted from chicken tissue, and the expression of prestin was confirmed by reverse transcription-PCR.
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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