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Prestin翻訳後修飾機構の解明-OHC運動能自己修復による内耳再生への挑戦-

阐明Prestin的翻译后修饰机制 - 通过OHC运动的自我修复对内耳再生的挑战 -

基本信息

批准号：
21659388
负责人：
欠畑誠治
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659388/
关键词：
外有毛細胞 prestin 内耳再生翻訳後修飾機運動能

项目摘要

外有毛細胞(OHC)膜内のモーター蛋白prestinには、機能を発現しているものと機能非発現のものとが共在している可能性が予備実験から示唆された。機能非発現のものを活性化させprestin至適発現密度を回復させることができれば、障害された運動能の再生が可能となる。前年度はG蛋白質による細胞内シグナル伝達機構に着目し、細胞内にG蛋白質のアゴニストであるGTP-γ-S(Guanosine 5'-O-(3-thiotriphospkate)tetralithium salt)を投与によるOHC運動能への影響を、electromotility、electromotilityを反映する電位依存性の膜容量(NLC)変化および細胞長の変化として検討した。今年度はG蛋白質のアンタゴニストであるGDP-・-S(Guanosine 5'-O-(2-thiodiphosphate)を細胞内へ投与し、そのOHC運動能への影響を、electromotilityを反映する電位依存性の膜容量(NLC)変化として検討した。方法1)Corti器を摘出し酵素処理後、外有毛細胞を単離した。2)細胞外液、細胞内液ともionic blocking solutionをもちい、いずれもpH7.2に調整した。浸透圧は内液外液ともgulcoseで300m0smに調整して使用した。3)パッチクランプはwhole-cell patcb clamp modeで解析した。結果1)G蛋白質を不活性化させるGDP-・-Sを細胞内液に溶解し、600μMとしてパッチピペットのガラス電極を通して外有毛細胞内に投与し5分間作用させた。まずM・CD(1mM)溶液を4分間灌流。次いでコレステロール(1mM)を灌流させた。この間NLCを1分毎に測定した。2)コントロール群ではコレステロール投与によりholding potential(V=0mV)ではcapacitanceの減少が観察された。一方、GDP-・-Sを細胞内投与した群ではコレステロールによるcapacitanceの減少が抑制された。3)NLCへの効果:コントロール群ではNLCが過分極方向へshiftするのに対し、細胞内にGDP-・-Sを投与した群では、NLCのshiftが有意に抑制された(p<0.05)。前年度と今年度の結果より、OHC膜内のモーター蛋白prestinによるelectromotilityはOHC細胞膜のcholesterolによって生じる調節を受けはており、その機序としてG蛋白による細胞内シグナル伝達系が関与している可能性が示された。

There are hair cells (OHC) on the outside and the protein prestin inside the membrane is functional. The function is not the same as the present one. The function is to activate and activate the 発appearance density to the appropriate 発appearance density and restore it, and to hinder the movement energy and regenerate the possibility of it. Previous year's G protein in cells GTP-γ-S(Guanosine 5'-O-(3-thiotriphospkate)tetralithium Salt) does not affect the kinetic energy of OHC, electromotility, and electromotility reflects the potential dependence of the membrane capacity (NLC) and changes in cell growth. This year's G Protein Novel GDP-・-S (Guanosine 5'-O-(2-thiodiphosphate) intracellular injection, OHC motility influence, electromotilit The change of membrane capacity (NLC) that reflects the potential dependence of y is done. Method 1) After the Corti organ is removed and treated with enzyme, the hair cells on the outside are separated. 2) The extracellular fluid and intracellular fluid should be adjusted to pH 7.2 as well as the ionic blocking solution. Soaking pressure, internal and external fluids, gulcose, 300m0sm, adjustment, use. 3)パッチクランプはwhole-cell patchcb clamp modeでanalyticsした. Result 1) G protein was inactivated and GDP-・-S was dissolved in intracellular fluid, 600 μM The としてパッチピペットのガラス electrode を通して has hair cells on the outside and the inside of the し5-minute action させた. The solution of まずM·CD (1mM) was perfused in 4 divided portions.いでコレステロール(1mM)をperfusionさせた. The NLC is measured every 1 minute. 2) コントロール集团ではコレステロールinvestment and によりholding potential(V=0mV)ではcapacitanceのREDUCINGが観看された. On the one hand, GDP-・-SをIntracellular injection of した集团ではコレステロールによるcapacitanceのREDUCTIONがされた. 3) NLC effect: コントロール群ではNLC excessive polar direction へshiftするのに対し, intracellularにGDP-・-Sをinvestment and したgroup では, NLC のshift が intentional にされた (p<0.05). The results of the previous year and this year, the protein prestin in the OHC membrane, the electromotility of the OHC cell membrane, the chol esterol によって生じる Regulation をReceived けはており、その机 sequence としてThe relationship between the G protein's intracellular structure and its potential is shown in the figure.