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Prestin翻訳後修飾機構の解明-OHC運動能自己修復による内耳再生への挑戦-

阐明Prestin的翻译后修饰机制 - 通过OHC运动的自我修复对内耳再生的挑战 -

基本信息

批准号：
21659388
负责人：
欠畑誠治
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659388/
关键词：
外有毛細胞 prestin 内耳再生翻訳後修飾機運動能

项目摘要

外有毛細胞(OHC)膜内のモーター蛋白prestinには、機能を発現しているものと機能非発現のものとが共在している可能性が予備実験から示唆された。機能非発現のものを活性化させprestin至適発現密度を回復させることができれば、障害された運動能の再生が可能となる。前年度はG蛋白質による細胞内シグナル伝達機構に着目し、細胞内にG蛋白質のアゴニストであるGTP-γ-S(Guanosine 5'-O-(3-thiotriphospkate)tetralithium salt)を投与によるOHC運動能への影響を、electromotility、electromotilityを反映する電位依存性の膜容量(NLC)変化および細胞長の変化として検討した。今年度はG蛋白質のアンタゴニストであるGDP-・-S(Guanosine 5'-O-(2-thiodiphosphate)を細胞内へ投与し、そのOHC運動能への影響を、electromotilityを反映する電位依存性の膜容量(NLC)変化として検討した。方法1)Corti器を摘出し酵素処理後、外有毛細胞を単離した。2)細胞外液、細胞内液ともionic blocking solutionをもちい、いずれもpH7.2に調整した。浸透圧は内液外液ともgulcoseで300m0smに調整して使用した。3)パッチクランプはwhole-cell patcb clamp modeで解析した。結果1)G蛋白質を不活性化させるGDP-・-Sを細胞内液に溶解し、600μMとしてパッチピペットのガラス電極を通して外有毛細胞内に投与し5分間作用させた。まずM・CD(1mM)溶液を4分間灌流。次いでコレステロール(1mM)を灌流させた。この間NLCを1分毎に測定した。2)コントロール群ではコレステロール投与によりholding potential(V=0mV)ではcapacitanceの減少が観察された。一方、GDP-・-Sを細胞内投与した群ではコレステロールによるcapacitanceの減少が抑制された。3)NLCへの効果:コントロール群ではNLCが過分極方向へshiftするのに対し、細胞内にGDP-・-Sを投与した群では、NLCのshiftが有意に抑制された(p<0.05)。前年度と今年度の結果より、OHC膜内のモーター蛋白prestinによるelectromotilityはOHC細胞膜のcholesterolによって生じる調節を受けはており、その機序としてG蛋白による細胞内シグナル伝達系が関与している可能性が示された。

There are OHC cells in the membrane and the protein prestin is present in the membrane, and the machine is able to detect the energy of the machine that is not available to the device. The machine can be used to activate the prestin to realize the density of the machine. It is possible that the energy regeneration of the vehicle may be damaged. In the previous year, the mechanism for measuring the concentration of G protein in the cell was focused on the determination of GTP- γ-S (Guanosine 5 3-thiotriphospkate O-(3-thiotriphospkate) tetralithium salt) and the effect of electromotility and electromotility on site-dependent membrane capacity (NLC), cell growth and cell growth. This year, the GDP--S (Guanosine 5 color color O-(2-thiodiphosphate) sensor intracellular injection, the OHC kinetic energy response, and the electromotility response to potential dependence on membrane capacity (NLC) have been studied. Method 1) after the enzyme was extracted from the Corti, the hairy cells were isolated. 2) extracellular fluid, intracellular fluid, ionic blocking solution fluid, pH7.2 fluid, extracellular fluid, intracellular fluid, extracellular Soak in the internal and external fluid, gulcose the 300m0sm, adjust the temperature and use the liquid. 3) make sure that the whole-cell patcb clamp mode is parsed. Results 1) G protein inactivation, GDP--S protein inactivation, intracellular liquids dissolving, 600 μ m ~ (- 1) μ m ~ (- 1) C ~ (- 1), C ~ (2 +), E ~ (2 +), G-protein inactivation, cytosolic lipopolysis, 600 μ M, extracellular hair intracellular injection and 5-point interaction. M ·CD (1mM) solution was perfused between 4 minutes. This is the second time that the perfusate was perfused (1mM). The inter-station NLC is measured by 1 minute per minute. 2) use holding potential (V=0mV) and capacitance to check the number of people you need to know. On the other hand, GDP--S intra-cellular injection and group intranasal intranasal injection caused less inhibition of capacitance activity. 3) the results of NLC response: the polarity direction of the cluster cluster, the shift cluster, the intracellular GDP--S, and the NLC shift intentionally inhibit the infection. The results of the previous year and this year showed that prestin protein in OHC membrane, electromotility protein, OHC protein, cell membrane, cholesterol protein, cell membrane, cell membrane, cell membrane,