トランスポゾンを用いたニワトリ胚細胞の半永久的遺伝子操作

使用转座子对鸡胚胎细胞进行半永久性遗传操作

• 批准号: 18657070
• 负责人: 高橋 淑子
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18657070/
• 关键词: トランスポゾン; エレクトロポレーション法; トリ胚; Tet-on; ゲノム; 発現誘導; テトラサイクリン

トリ胚を用いたエレクトロポレーション法は、さまざまな遺伝子を目的とする組織に導入する方法として極めて有効である。しかしながら、従来のエレクトロポレーション法の問題として、導入された遺伝子の発現が2〜3日間しか維持されないことであった。これは導入された遺伝子が核内染色体に組み込まれないために、細胞の増殖に伴って遺伝子コピー数が減少し、やがては消失してしまうことが原因と考えられていた。我々はこれまでに、これらの問題を克服するために、小型魚類で用いられているTol2トランスポゾン法をトリ胚エレクトロポレーション法に応用し、導入遺伝子をトリゲノム内に安定的に組み込むことに成功している。今年度はさらにこの方法を改良し、我々が最近トリ胚で確立したTet-on法とを組み合わせ、ゲノム上に安定的に組み込まれた外来遺伝子の発現時期を人工的にコントロールできる手法を確立した。準備したplasmidは以下の通り:1)目的とする遺伝子(たとえばEGFP)をTRE(Tetracycline-responsive element)によってドライブさせ、さらにこれらの発現カセットをTol2vectorに組み込んだplasmid。2)rtTA-M2(Dox依存的にTREに結合して転写を活性化させる因子をコードする)を組み込んだTol2vector。3)Tol2vector上の遺伝子カセットがゲノムに組み込まれるために必要なトランスポゼースを発現させるCAGGS-TP。これら3種のplasmidを、エレクトロポレーション法を用いてトリ胚内に共同入し、さらに3日後にDoxを注入すると、EGFPの発現が開始された。これらの新規の方法を用いると、これまで不可能であった胚発生の後期過程におこる器官形成における遺伝子の機能の解析が可能となる。

ト リ embryo を with い た エ レ ク ト ロ ポ レ ー シ ョ ン は, さ ま ざ ま な heritage 伝 son を purpose と す る organization に import す る method と し て extremely め て have sharper で あ る. し か し な が ら, 従 の エ レ ク ト ロ ポ レ ー シ ョ の ン method と し て, import さ れ た posthumous son 伝 の 発 が 2 ~ 3 day now し か maintain さ れ な い こ と で あ っ た. こ れ は import さ れ た posthumous son 伝 が nuclear chromosomes に group み 込 ま れ な い た め に, cell に の raised colonization with っ て posthumous son 伝 コ ピ ー が reduce し, や が て は disappear し て し ま う こ と が reason と exam え ら れ て い た. I 々 は こ れ ま で に, こ れ ら の を overcome す る た め に, small fish で い ら れ て い る Tol2 ト ラ ン ス ポ ゾ ン method を ト リ embryo エ レ ク ト ロ ポ レ ー シ ョ ン method に 応 し, import legacy 伝 son を ト リ ゲ ノ ム に stability within the group に み 込 む こ と に successful し て い る. Our は さ ら に こ の way を improved し, I 々 が recently ト リ embryo で establish し た Tet - on method と を group み close わ せ, ゲ ノ ム に on stable に group み 込 ま れ た foreign heritage 伝 son の 発 period now を artificial に コ ン ト ロ ー ル で き る gimmick を establish し た. Prepare た たplasmid とする the following <s:1> for とする :1) objective とする remnant 伝 (たとえばEGFP)をTRE(Tetracycline-responsive Element) に よ っ て ド ラ イ ブ さ せ, さ ら に こ れ ら の 発 now カ セ ッ ト を Tol2vector に group み 込 ん だ plasmid. 2) rtTA - M2 (Dox dependent に TRE に combining し て planning write を activeness さ せ る factor を コ ー ド す る) を group み 込 ん だ Tol2vector. 3) on the Tol2vector の heritage 伝 son カ セ ッ ト が ゲ ノ ム に group み 込 ま れ る た め に necessary な ト ラ ン ス ポ ゼ ー ス を 発 now さ せ る CAGGS - TP. こ れ ら three の plasmid を, エ レ ク ト ロ ポ レ ー シ ョ を ン method with い て ト リ eggs に together into し, さ ら に 3 later に Dox を injection す る と, EGFP の 発 が now start さ れ た. こ れ ら の new rules の way を with い る と, こ れ ま で impossible で あ っ た embryo 発 born late の process に お こ る organ formation に お け る posthumous son 伝 の function の resolution が may と な る.

项目成果

Early segregation of germ somatic lineages during gonadal regeneration in the annelid, Enchytraeus japonensis

环节动物日本Enchytraeus japonensis性腺再生过程中胚芽体细胞谱系的早期分离

• 发表时间: 2006
• 期刊: Current Biology 16
• 作者: Tanabe;K. et al.
• 通讯作者: K. et al.

Stage-dependent expression of Pax6 in optic vesicle/cup regulates patterning genes through signaling molecules

Pax6在视泡/视杯中的阶段依赖性表达通过信号分子调节模式基因

• 发表时间: 2007
• 期刊: Differentiation Vol.75
• 作者: Reza;H. M.;Takahashi;Y.;Yasuda;K.
• 通讯作者: K.

Level-specific role of paraxial mesoderm in regulation of Tbx5/Tbx4 expression and limb initiation.

轴旁中胚层在 Tbx5/Tbx4 表达和肢体起始调节中的水平特异性作用。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Developmental Biology 292
• 作者: Saito;D. et al.
• 通讯作者: D. et al.

Embryonic stem cells that differentiate into RPE cell precursors in vitro develop into RPE cell monolayers in vivo

• DOI: 10.1016/j.exer.2005.06.021
• 发表时间: 2006-02-01
• 期刊: EXPERIMENTAL EYE RESEARCH
• 影响因子: 3.4
• 作者: Aoki, H;Hara, A;Kunisada, T
• 通讯作者: Kunisada, T

Neural crest cell migration to the adrenal gland : CXCR4/SDF1 and BMP mediate guidance, while SF-1 is involved in target recognition

神经嵴细胞向肾上腺迁移：CXCR4/SDF1和BMP介导引导，而SF-1参与目标识别

• 发表时间: 2008
• 作者: Takahashi;Y.;高橋淑子
• 通讯作者: 高橋淑子