有尾両生類エゾサンショウウオにおける性染色体の特定と温度依存的性腺分化機構の解明

泌尿两栖类虾夷蝾螈性染色体的鉴定和温度依赖性性腺分化机制的阐明

基本信息

批准号：
18657074
负责人：
松田洋一
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

雌ヘテロ型(ZZ/ZW型)の性染色体構成をもつエゾサンショウウオ(Hynobius retardatus)において、性腺未分化時の幼生個体の遺伝的な雌雄を識別するための分子マーカーを開発する目的で、W染色体ヘテロクロマチン領域の反復配列のクローニングを試みた。数種の制限酵素で消化したゲノムDNAの電気泳動を行い、検出された反復配列のDNAバンドから得られたフラグメントを用いて染色体マッピングを行った結果、1対の常染色体対とW染色体のヘテロクロマチン領域に強いシグナルが検出されるクローンを得た。得られたクローンのシグナルは18S-28S rRNA遺伝子の位置と一致していたが、塩基配列を決定したところ18S-28S rRNA遺伝子のコード領域とは異なっていた。したがって、このDNAフラグメントは、18S-28S rRNA遺伝子の重複とともに増幅したスペーサー配列と考えられた。現在、W染色体特異的マーカーを得るため、この配列を含むゲノム領域の詳細な解析を行っている。20年度も引き続きエゾサンショウウオの卵を野外で採集し、20℃(対照群)と28℃(高温処理群)の条件下で飼育した、孵化後0,10,15,20,25,30,45,60日の幼生から性腺組織をサンプリングし、凍結保存を行った。これらを用いて、RT-PCR法によって性分化関連遺伝子(P450 aromatase, DMRT1,SF-1)の発現解析を行った結果、孵化後15-30日の高温処理によって遺伝的な雄個体の性腺が雌化するのに伴って、P450 aromataseとDMRT1の発現パターンが大きく変化することを明らかにした。一方、SF-1では大きな変化は見られなかった。今後は、発現パターンの変化を経時的に詳細に調べるとともに、AR,SOX3,SOX9についても同様の解析を行う。

在性别染色体组成的女性异态（ZZ/ZW类型）中，我们试图克隆W染色体异染色质区域的重复序列，目的是开发分子标记物，以鉴定Gonadal undrententiation时幼虫个体遗传性别的遗传性别。用电泳消化了用几种限制酶消化的基因组DNA，并使用从检测到的重复序列的DNA带中获得的片段进行染色体映射，从而导致克隆在其中在一对自身染色体对和W染色体的一对杂色区域中检测到强信号。所得的克隆信号与18S-28S rRNA基因的位置一致，但是当确定基本序列与18S-28S rRNA基因的编码区域不同时。因此，该DNA片段被认为是通过18S-28S rRNA基因的重复进行扩增的间隔序列。当前，正在对包含此序列的基因组区域进行详细分析以获得W染色体特异性标记。 In fiscal 2020, gonadal tissue was sampled from larvae at 0, 10, 15, 20, 25, 30, 45, and 60 days after hatching, and eggs of Ezo salamanders were collected outdoors, and kept under conditions of 20°C (control group) and 28°C (high temperature treatment group), and gonadal tissue was sampled from larvae at 0, 10, 15, 20, 25, 30, 45,孵化后60天，然后存储冷冻保存。使用这些，我们通过RT-PCR分析了性别分化相关基因（P450芳香酶，DMRT1，SF-1）的表达，并揭示了P450芳香酶和DMRT1的表达模式在孵化后的高温治疗15-30天后成为女性，随着遗传男性的性腺的变化急剧变化。另一方面，在SF-1中没有看到重大变化。将来，随着时间的推移，将详细研究表达模式的变化，并将针对AR，SOX3和SOX9进行类似的分析。