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チロシンホスファターゼによるプロテアソーム活性制御を介した情報伝達調節機構の解明

通过酪氨酸磷酸酶调节蛋白酶体活性阐明信号转导的调节机制

基本信息

批准号：
19658130
负责人：
青木直人
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19658130/
关键词：
チロシンリン酸化 TC-PTP PTP プロテアソームチロシン脱リン酸化

项目摘要

Tremblay教授(カナダ・マギル大学腫瘍学研究所)より供与されたTC-PTPノックアウトマウスの胎児胚より樹立されたMEF(mouse embryonic fibroblast)を用い,インスリンで刺激した際のインスリン受容体型PTKのインターナリゼーションと細胞膜表面への再局在の様子を,細胞生物学的手法,生化学的,分子生物学的手法を駆使して詳細に調べた。報告されているPDGFレセプター程ではないが,MEF-TC-PTP^<+/+>に比べMEF-TC-PTP^<-/->ではインスリン刺激後のインスリン受容体のインターナリゼーションが抑制され,チロシンリン酸化レベルも亢進していた。これらの結果はTC-PTPを標的としたsiRNAの導入によっても再現された。またMEF-TC-PTP^<-/->にTC-PTPおよびその欠失変異体を順次導入したところ,野生型ではフェノタイプが回復したが,C末端の塩基性アミノ酸クラスター領域を欠く変異体では回復しなかった。この変異体はプロテアソームに結合しないことから,同領域を介したTC-PTPとプロテアソームとの結合が,TC-PTPの機能発現に必須であることが明らかとなった。また野生型およびTC-PTPヘテロノックアウトマウスの肝臓および骨格筋を摘出し,ホモジネートを調製後,抗TC-PTP抗体を用いて免疫沈降したところ,野生型では26Sプロテアソームの共沈降が明確に確認出来たが,ヘテロノックアウトマウスでは,沈降量がほぼ半減していた。この結果は,個体レベルでもTC-PTPと26Sプロテアソームが結合して機能する可能性を強く示唆する。

Professor Tremblay (カナダ · マギル swollen sores university institute) よりさ and supply れた TC - inhibits PTP ノックアウトマウスの tire where embryo より set された MEF (mouse embryonic Fibroblast) をい, インスリンで stimulus した interstate のインスリン by capacity size PTK のインターナリゼーションと membrane surface への bureau again in の others child を, cell biology, biochemistry, molecular biology technique を駆 make して detailed に adjustable べた. Report されている PDGF レセプター cheng ではないが, MEF - TC - inhibits PTP ^ + / + < > に than べ MEF - TC - inhibits PTP ^ < - / - > ではインスリン stimulation のインスリン by let body のインターナリゼーションが inhibit され, チロシンリン acidification レベルも hyperthyroidism していた. <s:1> れら <s:1> results と TC-PTPを target と <s:1> たsiRNA <s:1> is introduced into によってされた reproducing された. また MEF - TC - inhibits PTP ^ < - / - > に TC - inhibits PTP およびその owe lost - variant を progressive import したところ, wild type ではフェノタイプが reply したが, C terminal の salt basic アミノ acid クラスタを owe くー field - variant では reply しなかった. この - variant はプロテアソームに combining しないことから, with field を interface した TC - inhibits PTP とプロテアソームとのが, TC - inhibits PTP の function 発に must now であることが Ming らかとなった. また wild-type および TC - inhibits PTP ヘテロノックアウトマウスの is crucial liver および skeletal muscle を picked out し, ホモジネートを modulated, TC - resistant を inhibits PTP antibody with いて immune sink したところ, wild type では 26 s プロテアソームの total sink がに clearly identified たが, ヘテロノックアウトマウスでは, shen Reduce by がほぼ by half a hundredth てたた. はこの results, individual レベルでも TC - inhibits PTP と 26 s プロテアソームが combining して function する strong possibility をく in stopping する.