脂肪細胞より分泌される機能性膜小胞の解析

脂肪细胞分泌的功能性膜囊泡的分析

• 批准号: 18052007
• 负责人: 青木 直人
• 金额: $ 5.76万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18052007/
• 关键词: 膜小胞; adiposome; MFG-E8; adipocyte

膜小胞の分泌機構を探るため,十分に分化した3T3-L1脂肪細胞をインスリン,TNF-α添加条件下および虚血誘導条件下で培養し,定法により膜小胞を集め,MFG-E8を始めとするマーカータンパク質に対するウエスタンブロット解析およびMMPをターゲットとしたザイモグラフィーを実施した。いずれの条件下でもアディポソーム主要タンパク質,MFG-E8の分泌量が増加し,各種阻害剤を用いた実験よりNF-κb経路がこの増加に深く関与することが明らかとなった。またマクロファージ(J774細胞)によるアディポソーム分泌制御の可能性を探るため非接触共培養(トランスウェル法),接触共培養系を用いて解析したところ,アディポソームを介したMFG-E8およびMMP-9の発現・分泌が有意に増加することを見出した。現在もsiRNAや中和抗体を用いてマクロファージに由来する原因分子の特定を行っている。MFG-E8のELISAによる高感度測定法の確立のため新たにN末端のEGF様ドメイン,C末端のC2ドメインに対するウサギポリクローナル抗体を作成した。市販のキャプチャーモノクローナル抗体とこれらを組み合わせることにより数十ng/mL程度の測定が可能になりつつある。またMFG-E8のホスファチジルセリンに対する高親和性を利用したアッセイ法も同様に開発した。両解析法とも現状では3T3-L1脂肪細胞の培養上清であれば高感度でMFG-E8の測定が可能である。MFG-E8ノックマウス(阪大・長田重一先生より分与)を用いて通常食,高脂肪食負荷実験に着手した。野生型に比べ抗肥満を呈する様子は今のところ観察していないが,今後各種血液パラメータの解析を通じ代謝状況の違いを明らかにする予定ある。また組織,細胞レベルでの解剖学的な違いについても順次解析する。

The secretion mechanism of membranous vesicles was explored, and the differentiation of 3T3-L1 adipocytes was well established. Under the condition of TNF-α addition and blood deficiency induction, the membranous vesicles were cultured under the condition of fixed method,MFG-E8 was initially used to analyze the secretion mechanism and MMP. Under these conditions,MFG-E8 secretion increases, and NF-κb pathway increases. To explore the possibility of secretion control of MFG-E8 and MMP-9 in J774 cells, non-contact co-culture method and contact co-culture system were used to analyze MFG-E8 and MMP-9. Now, siRNA neutralizes the molecular origin of the virus. Establishment of high sensitivity assay for MFG-E8 and preparation of EGF antibody at N-terminal and C-terminal The determination of levels of several tens of ng/mL is possible. MFG-E8 has been developed for its high affinity with the Internet. The present situation of analytical method is that the culture supernatant of 3T3-L1 adipocytes is highly sensitive to MFG-E8. MFG-E8 The wild type is more resistant to fertilizer than the present generation, and the future analysis of various blood types and metabolic status is determined. Tissue, cellular and anatomical analysis is performed sequentially.

项目成果

脂肪細胞が分泌する機能性膜小胞 (adiposome) の同定と分泌制御

脂肪细胞分泌的功能性膜囊泡（脂肪体）的鉴定和分泌控制

• 发表时间: 2007
• 期刊: 薬学雑誌 (日本薬学会誌) 127
• 作者: Iwaya;N.;Goda;N.;Unzai;S.;Fujiwara;K.;Tanaka;T.;Tomii;K.;Tochio;H.;Shirakawa;M.;Hiroaki;H.;小澤新一郎;青木直人
• 通讯作者: 青木直人

脂肪細胞が分泌する膜小胞 (アディポソーム) -同定と分泌制御機構-

脂肪细胞分泌的膜囊泡（脂肪体）-识别和分泌控制机制-

• 发表时间: 2007
• 作者: K.Amemiya;T.Yokoyama et al.;青木直人
• 通讯作者: 青木直人

食品・天然物成分による脂肪細胞・組織の機能改変

使用食物和天然成分对脂肪细胞和组织进行功能修饰

• 发表时间: 2008
• 作者: Sekine;Y.et al.(他7名);青木直人
• 通讯作者: 青木直人

抗酸化食品成分による活性酸素種をターゲットとした脂肪細胞・組織機能改変効果

抗氧化食品成分通过靶向活性氧对脂肪细胞/组织功能改变的影响

• 发表时间: 2007
• 作者: Sekine;Y.et al.(他7名);青木直人;青木直人;青木直人;青木直人;青木直人(他7名);荒川恵梨菜(他4名)
• 通讯作者: 荒川恵梨菜(他4名)

Functional regulation of mammary epithelial cells : from lactation to involution

乳腺上皮细胞的功能调节：从哺乳到复旧

• 发表时间: 2006
• 期刊: Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry 70
• 作者: Aoki