分泌膜小胞(アディポソーム)を介した脂肪細胞の機能発現機構の解明

阐明分泌膜囊泡（脂肪体）介导的脂肪细胞功能表达机制

基本信息

批准号：
20380185
负责人：
青木直人
金额：
$ 12.4万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20380185/
关键词：
膜小胞脂肪細胞マクロファージ miRNA mRNA MFG-E8 血管新生アディポサイトカイン

项目摘要

マイクロアレイ解析により,140種の異なるmiRNAがアディポソームに内包されることを明らかにし,そのうちlet-7b, miR-103, miR-146b, miR-148aの発現は,細胞内での発現量と呼応して3T3-L1脂肪細胞の分化程度に応じて増加することを特異プライマーを用いたリアルタイム定量RT-PCR法により明らかにした。またこれらmiRNAがマクロファージへ取込まれるかどうかについて検討したが,マクロファージ中で発現している内因性miRNAと区別することが難しいことから,個々のmiRNAのセンサー配列を有するレポーター遺伝子(分泌性ルシフェラーゼ)を恒常的に発現するRAW264.7マクロファージを数種類樹立し,現在も解析を重ねている途中である。マウス個体におけるアディポソームの動態を解析するために,蛍光タンパク質(EGFP, Venus)をC末端にもつMFG-E8を恒常的に発現する3T3-L1細胞を数種類樹立した。これらの細胞株を培養下で脂肪細胞へと分化させ,共焦点レーザー顕微鏡で観察したところ,アディポソームと思われる顆粒状の成分が細胞内から細胞外へと分泌される様子を捉えることに成功した(連携研究者・永山らとの共同研究)。現在移植に向けた準備を行っている。またマウス血液より調製した膜小胞には脂肪細胞特異的なアディポネクチン,レジスチン,PPARγ2のmRNAが内包されることが判明し,アディポソームは生体内でも脂肪細胞から分泌され,機能しうることが示唆された。アディポソームの主要構成成分であるMFG-E8ノックアウトマウスに高脂肪食を負荷すると,野生型マウスに比べて有意に肥満することが明らかとなった。アディポソーム自体の分泌が減少するのかどうかなど,肥満症との原因については現在検討しているところである(連携研究者・阪上らとの共同研究)。

微阵列分析表明，140种不同的miRNA被包裹在脂质体中，并使用特定引物的实时定量RT-PCR表明，根据3T3-L1脂肪的分化程度，let-7b，miR-103，miR-103，miR-146b和miR-148a的表达增加了响应响应在该细胞中的响应水平。我们还研究了这些miRNA是否被掺入巨噬细胞中，但是很难将它们与巨噬细胞表达的内源性miRNA区分开，因此我们已经建立了几种RAW264.7巨噬细胞，这些巨噬细胞组成了用单个miRNA的传感器序列进行组成表达记者基因（分泌荧光素酶），并且仍在重复进行分析。为了分析小鼠个体中脂质体的动力学，建立了几个用荧光蛋白（EGFP，Venus）组成的3T3-L1细胞在C-末端建立了MFG-E8。这些细胞系在培养下分化为脂质体，当使用共聚焦激光显微镜观察时，它们能够捕获从细胞内部到外部的颗粒成分的分泌，被认为是脂质体（协作研究人员Nagayama等人）。目前正在准备移植。还发现，脂质体是从脂质体，抵抗蛋白和PPARγ2mRNA中从小鼠血液中制备的脂质体分泌的，并建议可以从体内和功能中从脂肪细胞中分泌脂肪体。已经发现，与野生型小鼠相比，加载MFG-E8敲除小鼠（脂质体的主要组成部分）比野生型小鼠更肥胖。我们目前正在考虑肥胖的原因，例如脂肪体的分泌本身是否会减少（与合作伙伴研究人员Sakagami等人的协作研究）。