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乳汁に含まれる膜小胞含有RNAの生物学的機能の解明

牛奶中含有膜囊泡的 RNA 的生物学功能的阐明

基本信息

批准号：
21658117
负责人：
青木直人
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21658117/
关键词：
乳汁乳腺膜小胞 RNA microRNA

项目摘要

マンモソームを介した細胞間での遺伝子のやり取りの可能性を探るために,ウシマンモソームを培養下のNIH-3T3繊維芽細胞に添加して一定期間インキュベートした。細胞を十分洗浄後,RNAを抽出し,乳汁関連遺伝子(αs1-casein,αs2-casein,β-casein,β-lactoglobulin)に対する特異プライマーを用いてRT-PCRを実施した。調べたいずれのRNAも増幅されたことから,マンモソームを介して細胞への遺伝子移入の可能性が強く示唆された。また消化管内での取り込みを想定し,乳汁を酸性条件下で一定期間インキュベートした後,超遠心分離法によりマンモソームを調製し,引き続いてRNAを調製したところ,未処理サンプルと同程度のRNAが抽出された。さらに含まれるmRNA(αs1-casein,β-casein,β-lactoglobulin)およびmiRNA(miR-93,miR-101,miR-150)量をリアルタイム定量RT-PCR法あるいは半定量的RT-PCR法により測定したところ,酸処理と未処理群間で有意な差が認められなかったことから,マンモソームは腸管内でも比較的安定に存在出来る可能性が強く示唆された。またマンモソームに内包されるmRNAのうちαs1-casein,β-caseinはin vitroで翻訳されることも併せて明らかとなった。さらに予備的実験ながら,MFG-E8ノックアウトマウスの乳汁には野生型マウスと同程度のマンモソームRNAが含まれることも明らかとなった。

The NIH-3T3 cells in culture were cultured for a certain period of time. After cell washing,RNA was extracted, and the specific genes (αs1-casein,αs2-casein,β-casein,β-lactoglobulin) were detected by RT-PCR. The increase in RNA levels in the medium and the possibility of gene migration in the medium are strongly demonstrated. After a certain period of time in the digestive tract, the ultra-telecentric isolation method was used to modulate the RNA, and the untreated RNA was extracted. mRNA(αs1-casein,β-casein,β-lactoglobulin) and miRNA(miR-93,miR-101,miR-150) levels were measured by semi-quantitative RT-PCR, indicating a strong possibility of the presence of a relatively stable protein in the intestine. The expression of αs1-casein,β-casein in vitro is similar to that of αs1-casein. In addition,MFG-E8 can be used to prepare the wild type RNA.