乳汁に含まれる膜小胞含有RNAの生物学的機能の解明

牛奶中含有膜囊泡的 RNA 的生物学功能的阐明

基本信息

批准号：
21658117
负责人：
青木直人
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21658117/
关键词：
乳汁乳腺膜小胞 RNA microRNA

项目摘要

マンモソームを介した細胞間での遺伝子のやり取りの可能性を探るために,ウシマンモソームを培養下のNIH-3T3繊維芽細胞に添加して一定期間インキュベートした。細胞を十分洗浄後,RNAを抽出し,乳汁関連遺伝子(αs1-casein,αs2-casein,β-casein,β-lactoglobulin)に対する特異プライマーを用いてRT-PCRを実施した。調べたいずれのRNAも増幅されたことから,マンモソームを介して細胞への遺伝子移入の可能性が強く示唆された。また消化管内での取り込みを想定し,乳汁を酸性条件下で一定期間インキュベートした後,超遠心分離法によりマンモソームを調製し,引き続いてRNAを調製したところ,未処理サンプルと同程度のRNAが抽出された。さらに含まれるmRNA(αs1-casein,β-casein,β-lactoglobulin)およびmiRNA(miR-93,miR-101,miR-150)量をリアルタイム定量RT-PCR法あるいは半定量的RT-PCR法により測定したところ,酸処理と未処理群間で有意な差が認められなかったことから,マンモソームは腸管内でも比較的安定に存在出来る可能性が強く示唆された。またマンモソームに内包されるmRNAのうちαs1-casein,β-caseinはin vitroで翻訳されることも併せて明らかとなった。さらに予備的実験ながら,MFG-E8ノックアウトマウスの乳汁には野生型マウスと同程度のマンモソームRNAが含まれることも明らかとなった。

为了探索细胞之间妈妈介导的基因交换的可能性，将牛乳腺小子添加到NIH-3T3成纤维细胞中的培养物中并孵育一段时间。彻底清洗细胞后，提取RNA，并使用牛奶相关基因的特定引物（αS1-甲氧烷，αS2-酶，αS2-酶，β-蛋白，β-甲基蛋白，β-乳球蛋白）进行RT-PCR。所有检查的RNA均已放大，这强烈建议通过乳腺小体转移到细胞中的可能性。此外，为了预期胃肠道的摄取，将牛奶在一定时间段内在酸性条件下孵育，然后通过超速离心进行乳房组制备乳腺，然后准备RNA，然后制备RNA，然后将RNA与未经处理的样品相同的程度提取。此外，当MRNA（αS1-蛋白，β-酶，β-乳球蛋白）和miRNA（miR-93，miR-101，miR-150）的量通过实时定量RT-PCR或半品质的RT-PCR测量时，没有显着差异，并且在酸中的强烈差异是不存在的，并且在强烈的酸中存在着强烈的抑制作用。在肠道中。还揭示了在乳腺中包裹的mRNA中，在体外翻译了乳腺小体中的mRNA，αS1-酶素和β-蛋白。此外，一个初步实验表明，来自MFG-E8敲除小鼠的牛奶包含与野生型小鼠相似的乳房小鼠RNA。