イレッサ感受性診断プロテインチップの創製

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本研究においては、数多い細胞増殖因子受容体のなかで、がん化との直接の結びつきが明らかにされている上皮細胞増殖因子(EGF)に対する薬剤感受性をタンパク質レベル、タンパク質リン酸化レベルで解析するプロテインチップシステムの開発を目的とする。薬剤に対する感受性の異なる肺がん細胞におけるEGF受容体下流シグナルの相違を下流タンパク質の発現量と特異的リン酸化の変動の両方をタンパク質レベルで解析することで、ゲフィチニブ感受性をシグナル伝達系の相違として捉えるシステムを構築することを目指す。本年度においては、EGF受容体下流タンパク質のプロテオミクスにより新たに同定した新規タンパク質の機能解析とEGF刺激によるリン酸化部位及びそれに伴うユビキチン化部位の解析、タンパク質に対する抗体、部位特異的抗リン酸化抗体の作成などを昨年度に継続して行った。一方で、プロテインチップに適した基盤の開発をガラス基盤への結合化学、基板の表面処理、サンドイッチ法による検出などの観点で行った。サンドイッチ法では、抗タンパク質抗体を固定化した基盤上に試料を流し、標的タンパク質をアフィニティ・キャプチャした後、部位特異的抗リン酸化抗体によりリン酸化タンパク質を検出する。これまでに、2種類抗原-抗体の組み合わせを用い、それぞれを特異的に検出することに成功した。この過程で、用いる抗体の親和性が非常に重要であることを、SPR法を用いた別の解析で見出した。現在肺ガンとリン酸化の関連を解析中である。