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イレッサ感受性診断プロテインチップの創製

构建用于诊断易瑞沙敏感性的蛋白质芯片

基本信息

批准号：
19659080
负责人：
谷口寿章
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究においては、数多い細胞増殖因子受容体のなかで、がん化との直接の結びつきが明らかにされている上皮細胞増殖因子(EGF)に対する薬剤感受性をタンパク質レベル、タンパク質リン酸化レベルで解析するプロテインチップシステムの開発を目的とする。薬剤に対する感受性の異なる肺がん細胞におけるEGF受容体下流シグナルの相違を下流タンパク質の発現量と特異的リン酸化の変動の両方をタンパク質レベルで解析することで、ゲフィチニブ感受性をシグナル伝達系の相違として捉えるシステムを構築することを目指す。本年度においては、EGF受容体下流タンパク質のプロテオミクスにより新たに同定した新規タンパク質の機能解析とEGF刺激によるリン酸化部位及びそれに伴うユビキチン化部位の解析、タンパク質に対する抗体、部位特異的抗リン酸化抗体の作成などを昨年度に継続して行った。一方で、プロテインチップに適した基盤の開発をガラス基盤への結合化学、基板の表面処理、サンドイッチ法による検出などの観点で行った。サンドイッチ法では、抗タンパク質抗体を固定化した基盤上に試料を流し、標的タンパク質をアフィニティ・キャプチャした後、部位特異的抗リン酸化抗体によりリン酸化タンパク質を検出する。これまでに、2種類抗原-抗体の組み合わせを用い、それぞれを特異的に検出することに成功した。この過程で、用いる抗体の親和性が非常に重要であることを、SPR法を用いた別の解析で見出した。現在肺ガンとリン酸化の関連を解析中である。

The purpose of this study is to explore the development of receptor sensitivity to EGF in the context of the direct interaction between EGF and receptor receptors for cell growth factors. The sensitivity of EGF receptor is different from that of lung cells. This year, the EGF receptor down-stream protein expression system was newly identified, the protein expression system was newly developed, the protein expression system was functionally analyzed, the EGF stimulation system was developed, the protein expression system was developed, and the protein expression system was developed. The development of a substrate, the bonding chemistry of a substrate, the surface treatment of a substrate, the detection of a substrate, and the processing of a substrate. Anti-acid antibody immobilized on a substrate, site-specific anti-acid antibody immobilized on a substrate These two types of antigen-antibody combinations were successfully used in combination with specific antigen-antibody combinations The affinity of the antibody is very important in the process and analysis of SPR method. The relationship between lung acidification and lung cancer is analyzed.

项目成果

期刊论文数量（15）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

生理活性物質と相互作用する物質の効率的スクリーニング方法

与生理活性物质相互作用的物质的高效筛选方法

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Crystal structure of bovine lipoyltransferase in complex with lipoyl-AMP.

DOI：
10.1016/j.jmb.2007.05.059
发表时间：
2007-08
期刊：
Journal of molecular biology
影响因子：
5.6
作者：
K. Fujiwara;H. Hosaka;M. Matsuda;K. Okamura-Ikeda;Y. Motokawa;Mamoru Suzuki;A. Nakagawa;H. Taniguchi-H
通讯作者：
K. Fujiwara;H. Hosaka;M. Matsuda;K. Okamura-Ikeda;Y. Motokawa;Mamoru Suzuki;A. Nakagawa;H. Taniguchi-H

An a posteriori calibration method for improving protein identification accuracy in proteomics using electrospray ionization time-of-flight tandem mass spectrometry.

一种使用电喷雾电离飞行时间串联质谱法提高蛋白质组学中蛋白质鉴定准确性的后验校准方法。