生細胞でのリン酸化反応の可視化技術の開発

活细胞磷酸化反应可视化技术的开发

• 批准号: 20657039
• 负责人: 稲垣 昌樹
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20657039/
• 关键词: リン酸化反応; 抗リン酸化ペプチド抗体; 抗体遺伝子; 細胞内反応可視化

本研究では、まず、ビメンチンリン酸化抗体可変領域の遺伝子を単離同定し、オープンサンドウィッチイライザ実験系を確立した。次に、従来のリコンビナント抗体発現法に従って、リン酸化抗体可変領域を哺乳類細胞に発現させてみたが、リン酸化ビメンチンを特異的に認識しなかった。そこで、可変領域をタンパク質発現・精製し、哺乳類細胞に導入することを試みることにした。そのために、抗体のラペル方法とタンパク質細胞導入法を確立した。今後、可変領域変異クローンライブラリーからオープンサンドウィッチイライザ実験系を用いて計測した抗原特異的結合性をもとに、細胞内導入時に機能する可変領域配列を決定する予定である。また、リン酸化反応を可視化するための方法として、嫌気性細菌由来蛍光蛋白質を用いた蛋白質相互作用検出法であるプロテイン・コンプレメンテーション解析法を計画している。まず、この嫌気性細菌由来蛍光蛋白質を哺乳類細胞で発現させた。細胞株によっては、この嫌気性細菌由来蛍光蛋白質を発現させると、細胞のダメージが大きく、発現量が非常に少なかった。しかし、汎用性の高い2細胞株について、細胞のダメージは認められず、強い蛍光が観察された。現在、従来法のプロテイン・コンプレメンテーション解析法に用いている蛍光蛋白質切断箇所と比較して予想される切断場所で、本研究に用いている嫌気性細菌由来蛍光蛋白質を分断し、この解析法に用いることが可能か、試している。

In this study, we found that the acidified antibodies could be isolated from each other in the field, so that the acidified antibodies could be confirmed. In recent years, antibodies have been tested and acidified antibodies can be used in the field of mammalian cells to detect and acidify specific antibodies. In the field of medicine, we can learn more about the success of mammalian cells and mammalian cells. The method of anti-virus and antibody was used to confirm the establishment of the cell. In the future, it is possible to determine the combination of antigenic characteristics and intracellular entry time in the field. The method of acidizing and acidizing can be used to determine the origin of light protein and antifungal bacteria. the method of protein interaction is used to analyze the method of analysis. The cause of phosphoprotein and antifungal bacteria has been found in mammalian cells. The cell lines and suspicious bacteria come from light protein, light protein, cell strain, cell line, cell line, cell line, Cell lines, cells, cells, Now, in this study, we use the light protein to cut the light protein in the field, in this study, we use the light protein to cut off the light protein, the light protein is broken, and the light protein is broken.

项目成果

Novel TPHD proteins : keratin-binding proteins act as the regulator for the cell-cell adhesion

新型 TPHD 蛋白：角蛋白结合蛋白充当细胞间粘附的调节剂

• 发表时间: 2008
• 作者: Inoko;A.;Inagaki M.
• 通讯作者: Inagaki M.

Protein phosphatase 4 catalytic subunit regulates Cdk1 activity and microtubule organization via NDEL1 dephosphorylation.

• DOI: 10.1083/jcb.200705148
• 发表时间: 2008-03-24
• 期刊: JOURNAL OF CELL BIOLOGY
• 影响因子: 7.8
• 作者: Toyo-oka, Kazuhito;Mori, Daisuke;Yano, Yoshihisa;Shiota, Masayuki;Iwao, Hiroshi;Goto, Hidemasa;Inagaki, Masaki;Hiraiwa, Noriko;Muramatsu, Masami;Wynshaw-Boris, Anthony;Yoshiki, Atsushi;Hirotsune, Shinji
• 通讯作者: Hirotsune, Shinji

The keratin-binding protein Albatross regulates polarization of epithelial cells.

角蛋白结合蛋白信天翁调节上皮细胞的极化。

• DOI: 10.1083/jcb.200803133
• 发表时间: 2008-10-06
• 期刊: The Journal of cell biology
• 作者: Sugimoto M;Inoko A;Shiromizu T;Nakayama M;Zou P;Yonemura S;Hayashi Y;Izawa I;Sasoh M;Uji Y;Kaibuchi K;Kiyono T;Inagaki M
• 通讯作者: Inagaki M

Palmitoylation of ERBIN is required for its plasma membrane localization

• DOI: 10.1111/j.1365-2443.2008.01198.x
• 发表时间: 2008-07-01
• 期刊: GENES TO CELLS
• 影响因子: 2.1
• 作者: Izawa, Ichiro;Nishizawa, Miwako;Inagaki, Masaki
• 通讯作者: Inagaki, Masaki