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ミエリン形成障害ミュ-タントにおけるオリゴデンドロサイト変性脱落の機構の解明

阐明髓鞘形成受损突变体少突胶质细胞变性和脱落的机制

基本信息

批准号：
01480155
负责人：
御子柴克彦
金额：
$ 2.62万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至 1990
项目状态：
已结题

项目摘要

遺伝性にミエリン形成障害を示すジンピ-マウスにおいてはミエリンの主要構成蛋白質であるプロテオリピド蛋白(PLP)の遺伝子内に点突然変異が見い出されており、ミエリン形成細胞であるオリゴデンドロサイト(ODC)が変性脱落する。本研究において、遺伝子導入を通してその治療を試みた。まず、ジンピ-変異を同定する遺伝子診断法を開発した。すなわち、ジンピ-変異の両側をはさむようにオリゴヌクレオチドを合成し、その領域をPolymerase Chain Reaction(PCR)法により増幅した。ポリアクリルアミド電気泳動後メンブランにトランスファ-し、オリゴヌクレオチドプロ-ブで検出することにより、野生型とジンピ-型の識別ができるようになった。次に、PLPの発現ベクタ-を用いてトランスジェニックマウスを作製した。マウスPLP遺伝子のプロモ-タ-領域とポリA付加部位を持ち、間にラットPLP cDNAを含んだPLPミニジ-ンを構築し、マウス受精卵前核に注入した。生まれて来た24匹のトランスジェニックマウスを解析したが外来性のPLPミニジ-ン由来のPLPを発現しているマウスはいなかった。この理由としてPLP発現ベクタ-に発現に必須な領域を充分に含んでいなかったことが考えられるのでPLP全遺伝子をクロ-ニングし、トランスジェニックマウスを作製し直すことを計画した。Lorist Bコスミドベクタ-を用いてマウスジェノミックライブラリ-を作製しPLP cDNAおよびPLP遺伝子の5′、3′末端に対応する合成オリゴヌクレオチドでスクリ-ニングしたところ、5′上流領域20kb、3′下流領域5kbを含んだPLP全遺伝子をクロ-ニングすることに成功した。現在、このものを用いてトランスジェニックマウスを作製中である。この系が確立されれば導入するPLP遺伝子を改変することによりPLP異常とオリゴデンドロサイトの変性脱落との関連が推察できると思われる。

The formation of a barrier indicates that the main component of the protein is the protein (PLP). There is a sudden change in the size of the protein (ODC), which is caused by the formation of cells. In this study, the students were enrolled in the trial of general education and medical treatment. The rules and regulations are the same as those in the sub-system method. In the field of Polymerase Chain Reaction (PCR) method, in the field of synthesis, in the field of synthesis, and in the field of synthesis. After the electric stroke, they did not know what to do, and the wild type and the wild type did not know what to do. For the second time, PLP, please make sure that you don't know if you want to make a mistake. The location of the PLP, the PLP cDNA, the PLP, the anterior nucleus of the fertilized egg, and the zygote. The reason for the exoteric PLP infection is that it is caused by PLP infection. The reason for this is that it is necessary to have a full range of information in the field, including the full information of the PLP. The reason is that it is necessary to make sure that the system is designed for the purpose of direct planning. Lorist B