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相同的組換えによる遺伝子破壊に基づくDNAトポイソメラーゼの機能解析

基于同源重组基因破坏的 DNA 拓扑异构酶功能分析

基本信息

批准号：
03454496
负责人：
安藤俊夫
金额：
$ 3.39万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至 1993
项目状态：
已结题

项目摘要

哺乳類動物のDNAトポイソメラーゼ(トポ)Iの生理機能を細胞レベルと個体レベルで明らかにする事を目的とし、次の実験を順次行い次の結果を得た。(1)ヒトトポIのcDNAをプロープとしてマウストポIcDNAクローンを得た。塩基配列の決定、アミノ酸配列の推定を行い、ヒトトポIのそれと比較した所、96%同一アミノ酸で相同性を示した。その機能的重要性を示す。(2)クローン化cDNAを用いて、マウストポI遺伝子の染色体上の位置をRFLV法を用いて決定した。即ち、実験用マウスNOD,CBA/KIと野生マウスMOL-MITの間で制限酵素HindIII切断パターンの変化(Restriction endonuclease Fragment Length Variation,RFLV)と三点検定交配の解析より、トポI遺伝子は、第2染色体の54.5にユニーク遺伝子としてマップされた。ヒトゲノムで検出された擬遺伝子はマウスでは認められなかった。(3)マウスcDNAをプローブにして、マウスの精子DNAからのCharon4Aゲノムライブラリーをスクリーニングし、exon4から8までを含むクローン2個を得た。exon7に存在するEcoVのユニークな切断部位を利用して、Neo耐性遺伝子とTK遺伝子をそれぞれ挿入した遺伝子破壊に用いるためのプラスミドの構築を行った。マウスの胚性腫瘍EC細胞にこのプラスミドの導入を行い形質転換株〜30株を取得した。PCR法により相同組換えを検討したが、現在までの所、得られなかった。

Mammalian DNA-derived DNA is used to detect the physiological function of cells and individuals, and to determine the purpose, sequence and effect of the sequence. (1)The first time I saw him, I saw him. The determination of the base alignment, the estimation of the base alignment, the comparison of the base alignment, and the identification of 96% of the base alignment are shown. The importance of this function is demonstrated. (2)RFLV method is used to determine the position of the cDNA on the chromosome. The Restriction endonuclease Fragment Length Variation (RFLV) and three-point mating analysis were used to analyze the DNA sequence of chromosome 1, chromosome 2 and chromosome 54.5. It's not like we're going to be able to do this. (3)The DNA sequence of the sperm is called Charon4A, which contains two genes. Exon7 contains EcoV and TK genes, which can be used to construct the gene. 30 plants were obtained from embryonic carcinoma EC cells. The PCR method is the same as the group discussion, and now it is the same as the group discussion, and it is the same as the group discussion.