特異自己免疫抗体の出現は劇症肝炎発生の原因か?肝炎自然発症(LEC)ラットをモデルとして

以自发性肝炎（LEC）大鼠为模型，特异性自身免疫抗体的出现是暴发性肝炎的原因吗？

基本信息

批准号：
04807159
负责人：
横井毅
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

LECラット血清中に肝炎発症に先立って,肝ミクロゾームの56KD蛋白に対する自己免疫性抗体が発現することを見い出した。この自己免疫性抗体はトランスアミナーゼなどの血清検査値で認めうる肝炎所見の変化に先立ち4〜5週令で出現してきた。さらに劇症型肝炎で死亡したLECラット全例にこの抗体を認めた。その内約40%が55KD蛋白に対する抗体も有した。この自己免疫性抗体が肝炎発症または進展にとって重要な物質である可能性が考えられたため,これらの抗原蛋白の同定を行なった。二次元電気泳動,immunoblot分析により,自己免疫性抗体と反応するスポットを単離し,N末端アミノ酸配列を決定した。ホモロジー検索から56KD蛋白はプロテインジスルフィドイソメラーゼ(PDI),55KD蛋白はカルレチクリンであると推定した。さらに,抗PDI抗体を用いた阻害試験や諸性質から56KD蛋白をPDIと確認した。一方,カルレチクリンはラット肝ミクロゾームより精製し,前記と同じN末端アミノ酸配列を確認し,免疫学的同定も行なった。PDIの出現強度・頻度が高いことより,PDIに焦点を絞って実験的薬物性肝炎発症の動物モデルの検討を行った。種々の肝炎発症薬物をラットに投与した結果,アセトアミノフェンとジエチルマレイン酸の併用投与,または,D-ガラクトサミン投与で抗PDIの力価が上昇することをラジオイムノアッセイで確認した。いづれもGPTが共に顕著に上昇した。四塩化炭素,DL-エチオニン,アセトアミノフェン,ジエチルマレイン酸などの単独投与では,抗PDI抗体はほとんど認められず,肝炎発症機序の違いが示唆された。

发现在肝炎发育之前，在LEC大鼠血清中表达了肝微粒体56KD蛋白的自身免疫性抗体。这种自身免疫性抗体出现在肝炎发现变化之前的4至5周，在血清学测试值（例如转氨酶）上可以看到。此外，在死于暴发性肝炎的所有LEC大鼠中都观察到了这种抗体。其中约40％的还具有55KD蛋白的抗体。由于认为这种自身免疫性抗体可能是肝炎发育或发育的重要物质，因此鉴定出这些抗原蛋白。通过二维电泳和免疫印迹分析分离与自身免疫抗体反应的斑点，并确定N末端氨基酸序列。同源性搜索表明56KD蛋白是蛋白二硫化物异构酶（PDI），而55KD蛋白是钙网蛋白。此外，使用抗PDI抗体和各种特性，将56KD蛋白证实为PDI。同时，从大鼠肝微粒体中纯化了钙网蛋白，并确认了相同的N末端氨基酸序列，还进行了免疫学鉴定。由于PDI的强度和频率很高，我们专注于PDI，并检查了实验药物诱导的肝炎的动物模型。对大鼠施用了各种产生肝炎的药物，放射免疫测定证实，抗PDI滴度随乙酰氨基酚和二乙基马来酸的组合增加或D-半乳糖胺的给药而增加。这两个GPT都显着增加。当四氯化碳，DL-依二氨氨酸，对乙酰氨基酚，二乙基甲酸酯和其他单独使用时，很少观察到抗PDI抗体，这表明肝炎发育机理有所不同。