权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

チトクロ-ムPー450の新しい生理的意義に関する研究ー内因性生理活性ペプチドの調節における役割ー

细胞色素P-450的新生理意义研究 - 调节内源性生理活性肽的作用 -

基本信息

批准号：
03807144
负责人：
横井毅
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

チトクロ-ムPー450(以下Pー450)の生体内での多様な機能の一つとして、蛋白から生理活性ペプチドへのプロセッシングの過程で関与するという仮説の基に研究を行なった。すなわち、Pー450関与のラジカル的酸化が第一ステップとなり、続いて酸化部分を目印として、プロテア-ゼ・ペプチダ-ゼが作用し、ポリペプチドの切断が起きるという可能性について検討した。生体内ポリペプチドはアルギニンまたはロイシン部分で特異的に切断される場合が多いことが知られている。本研究ではメチオニンーエンケファリン(MetーEn)、ロイシンーエンケファリン(LeuーEn)の両側2〜3アミノ酸を延長させた前駆体ポリペプチドを3種類(LeuーEn;9アミノ酸長,MetーEn;9と10アミノ酸長)合成した。これらは、アルギニン部分が認識・切断されるとエンケファリン(En)になり、生体内では主に副腎で反応が行なわれる。合成したペプチドはHPLCで精製後、アミノ酸分析で純度が95%以上であることを確認して実験に供した。牛副腎のミクロゾ-ム(Ms)や9000×g上清を用い、種々のin vitroの反応条件を検討した。分析はメタノ-ル抽出後、HPLC(capcel pack C_<18>カラム、移動相;50mMnNaH_2PO_4:アセトニトリル=88:12)を用いる方法が最適であった。内部標準は市販MetーEn,LeuーEnを用いた。in vitroでの反応の結果、MsではNADPH精製系の有無にかかわらず、Msに依存した切断(代謝)は認められなかった。一方、9000×g上清単独のみでペプチドの切断が認められた。ヒト肝Msや9000×g上清を用いた系でも、牛副腎での結果と同じであった。また、鉄イオンやアスコルビン酸の影響など、生体内の酸化還元状態を考慮した系でも検討したが、明確な結果は得られなかった。しかし、9000×g上清での代謝反応はMetーEn,LeuーEnからさらに断片化反応が容易に進行することから、in vivoでのEn産生とは異なる機構であると考えられた。前駆体ペプチドから特異的にEnを産生するための限定分解の機構は9000×g上清成分の関与とは別の機構が存在することが示唆された。今後、よりin vivoに近い実験系で詳細に検討を行なう必要があると思われる。

The following P450 (below P450) is used in vivo to determine the physiological activity and physiological activity of the protein in vivo. The acidizing of the first, the first, the acidified part of the acidified parts, the first, the first, the second, the first, the In the body, there is a special part of the body that has been cut off in the body. The purpose of this study is to improve the synthesis of precursors (Leutene). In this study, the synthesis of precursors has been studied in this study. in this study, we have studied the synthesis of three kinds of compounds (Leutroen, 9-methylethyl, Metalen; 9-10-benzoate). In some cases, please do not know what to do. If you are living in the body, you will have to pay attention to En. After synthesizing the essence of HPLC, the degree of acid analysis is above 95%. The supernatant of bovine parenteral fat (Ms) 9000 × g was used in the supernatant, and the anti-in vitro condition of the supernatant was different. After being extracted, the HPLC (capcel pack closeness, moving phase; 50mMnNaH_2PO_4: sampling temperature = 88:12) was analyzed with the most accurate method. The internal standard is "Met" En,Leu "En". The results of in vitro reverse test, the result of Ms test NADPH system, and the result of Ms dependency test have been shown to be effective. On the other hand, 9000 × g supernatant was used to cut off the temperature. The results of the supernatant of liver Ms 9000 × g were the same as those of bovine parenteral fluid. The results show that there is no significant difference between the two groups, and the results show that there is no significant difference between the two groups. On behalf of the 9000 × g supernatant, it is easy to detect the fragmentation of the Met En,Leu system, the in vivo system, the En system, and the computer system. There is a limit on the decomposition of the components in the supernatant of 9000 × g in the En system of the previous system, which indicates that there are significant differences in the composition of the supernatant and that of other organs. From now on, you will need to know if it is necessary to think about it in the near future.