VIII型コラーゲン発現調節因子の分子生物学的研究

VIII型胶原表达调节剂的分子生物学研究

• 批准号: 05454184
• 负责人: 村垣 泰光
• 金额: $ 3.07万
• 依托单位: Wakayama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05454184/
• 关键词: コラーゲン; 遺伝子; プロモーター; CATアッセイ

研究計画に従って培養角膜内皮細胞からmRNAを抽出しその中にVIII型コラーゲンalpha2鎖のメッセージが豊富に存在することを確かめた。そのmRNAを用いてプライマー伸展法によりVIII型コラーゲンalpha2鎖をコードするcDNAを5'端まで伸展させた。このcDNAをプローブとして用いてマウス遺伝子ライブラリーをスクリーニングした。その結果2つの陽性クローンが得られそれぞれをプラスミドベクターにサブクローニングした。それぞれのクローンの詳細な制限酵素地図を描きエクソンの位置を決定したところひとつのクローンには以前報告した約2kbある大きいエクソンとそこから300bp上流に196bpからなるエクソンが存在した。それに対してもうひとつのクローンにはcDNAの5'端のシークエンスを含む約160bpのエクソンが存在し一番目のエクソンと考えられた。そのエクソンの上流域約2kbについてVIII型コラーゲンalpha2鎖遺伝子のプロモーター活性を検討している。まず転写開始部位近傍のシークエンスを行った結果数個のSP1結合部位が見られたがCATボックスおよびTATAボックスは見られなかった。次にその上流域2kbの遺伝子断片をCATベクターに挿入したCATコンストラクトを作製し上流から約500bpずつ削減した3種の削減型コンストラクトを得た。現在これらを培養角膜内皮細胞にトランスフェクトしそれぞれのCATアクティビティーを測定している。さらにこの2kbの遺伝子断片をbetaガラクトシダーゼ遺伝子に接続し、それをマウスに導入して胎児マウスでのVIII型コラーゲンalpha2鎖の発現を検討中である。

The study was conducted to determine the presence of alpha2 in cultured corneal endothelial cells. The 5'end of the cDNA is extended by the alpha2-terminal region of the mRNA. This cDNA sequence is called "DNA sequence." The results of the study are as follows: 1. The detailed control of the enzyme site was determined by the location of the enzyme site previously reported to be about 2kb. The 5'-end cDNA of the cDNA contains about 160bp of the cDNA. The upper part of the virus is about 2 kb. The activity of the alpha2 protein is studied. A few SP1 binding sites near the start of the writing process are found in CAT and TATA. The next two 2kb fragments of the upstream region were detected by CAT detection. The upstream region was about 500bp long and the three types of reduced DNA fragments were detected by CAT detection. Now, we're going to culture corneal endothelial cells, and we're going to test them. The 2kb DNA fragment is currently under investigation for the development of type VIII DNA alpha2.

项目成果

Muragaki,Y.et al.: "The human alpha1(XV)collagen chain conteins a large amino-terminal non-triple helical domain with a tandem repeat structure and homology to alpha1(XVIII)collagen" J.Biol.Chem.269. 4042-4046 (1994)

Muragaki,Y.et al.：“人类 α1(XV) 胶原链包含一个大的氨基末端非三螺旋结构域，具有串联重复结构并与 α1(XVIII) 胶原同源”J.Biol.Chem.269。