ES細胞を用いたVIII型コラーゲンα1鎖遺伝子の相同組換え

使用ES细胞同源重组VIII型胶原α1链基因

• 批准号: 04670217
• 负责人: 村垣 泰光
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Wakayama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670217/
• 关键词: VIII型コラーゲンα1鎖; ES細胞; 相同組換え

本研究の目的は角膜内皮細胞が主に産生するVIII型コラーゲンのうちのα1鎖をコードする遺伝子をES細胞(胚性幹細胞)を用いてターゲッティングを行なうことであった。ターゲッティングベクターの作製にはすでにクローニングされていたマウスVIII型コラーゲンα1鎖遺伝子を用いた。その遺伝子からポリアデニレーション部を除きpBluescriptに挿入した。次にエクソンのユニークな部位にポリアデニレーション部を欠いたネオマイシン耐性遺伝子を組み込んだ後、遺伝子の5'未端にチミジンキナーゼ遺伝子を入れターゲッティングベクターを完成させた。このベクターDNAをエレクトロポレーション法によりES細胞にトランスフェクトした後、ES細胞をG418およびGANCを含むメディウムで2週間培養した。形成されたES細胞のコロニーからDNAを抽出し、HindIIIで切った後ターゲッティングベクター外の遺伝子断片をプローブとしてサザーンブロッティングを行った。その結果250個のコロニーから抽出したDNAのうち3個にネオマイシン耐性遺伝子が挿入されることにより生ずるバンドが内因性のバンドより大きい部位に認められた。この研究の最終目的はVIII型コラーゲンα1鎖欠損マウスを作製し、その遺伝子および分子の機能を解明することであるため今回得られた陽性クローンはマイクロインジェクション法によりマウスの胞胚内に植え込みキメラマウスを作製し、そのキメラマウスをかけあわせることによりターゲッティングされたVIII型コラーゲンα1鎖遺伝子を胚細胞に移行させることが今後の課題である。

The aim of this study was to establish a new type of stem cell for embryonic stem cells. The first step in the process of production is to reduce the production cost and reduce the production cost. In addition to the Bluescript section, there are also several ways to improve the quality of the products. The second part of the solution is the part of the solution that is not in the middle of the solution. The second part of the solution is the part of the solution that is in the middle of the solution. The third part of the solution is the part of the solution that is in the middle of the solution. The third part of the solution is the part of the solution that is in the middle of the solution. The fourth part of the solution is the part of the solution that is in the middle of the solution. The third part of the solution is the part of the solution that is in the middle of the solution. The fourth part of the solution is the part of the solution that is in the solution. The fifth part of the solution is the part of the solution that is in the solution. The fourth part of the solution is the part of the solution that is in the solution. The fifth part of the solution is the part of the solution that is in the solution. The fifth part of the solution is the solution that is in the solution. The fifth part of the solution is the solution that is in the solution. The fifth part of the solution is the solution that is in the solution that the solution that is in the The ES cells were cultured for 2 weeks in the presence of G418 and GANC. The DNA of ES cells was extracted and HindIII was cut into pieces. As a result, 250 DNA fragments were extracted from the genome, and 3 DNA fragments were isolated from the genome. The ultimate goal of this study is to understand the function of the gene in the embryo. This is the first time that we've had a problem with embryo migration.