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ヒスタミンN-メチル基転移酵素活性変動に対する性ステロイドの効果

性类固醇对组胺 N-甲基转移酶活性波动的影响

基本信息

批准号：
05670133
负责人：
竹村基彦
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Hyogo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至 1994
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ラット腎臓におけるヒスタミンN-メチル基転移酵素(HMT)活性の性ステロイドによる制御機構の解明のために,ウェスタンブロット法による酵素タンパク量の定量法を開発した。この方法に用いる抗体は大腸菌で発現させ,完全に精製した組み替え型ラット腎HMTを家兎に免疫することにより作成した。本坑体はラットのみならずマウス,モルモットのHMT活性を免疫沈降し,諸臓器抽出物のウェスタンブロットでラットHMTと近い分子量のタンパクを認識した。ラット,マウス,モルモットのウェスタンブロットでこのタンパクの染色性はHMT活性量と強い正の相関を示した。2.ラット遺伝子ライブラリーからHMT cDNAをプローブとして陽性クローンを1個単離し,塩基配列を決定した。その結果,このクローンはHMT遺伝子の1部を含み、ラットHMT遺伝子は5個以上のエクソンからなり,全長10.4kb以上であることがわかった。3.ヒト腎臓cDNAライブラリーからHMT cDNAをクローニングし、全長の塩基配列を決定した。ノザンブロット解析によりヒト上下気道,腎臓におけるHMTの発現を確認した。FISH法によりHMTの遺伝子座を1p32と決定した。ヒト気管・気管支のヒスタミンによる収縮がHMT阻害剤により増強されるがジアミン酸化酵素阻害剤は無影響であることを示し,ヒト気道における内因性ヒスタミンの不活性化は主としてメチル化経路であることを示した。4.もう一つのヒスタミンの不活性化酵素であるジアミン酸化酵素をラット小腸から精製し、抗体を作成した。本抗体に対する各種哺乳動物の種々の組織中のジアミン酸化酵素の反応性について検討した。

1. Development of a quantitative method for determining the activity of HMT by enzyme control mechanism. This method uses antibodies against E. coli to develop, refine, and replace HMT. The present invention relates to a method for detecting HMT activity of a substance, and a method for detecting HMT activity of a substance extracted from the substance. A strong positive correlation between the activity of HMT and the coloration of HMT is shown. 2. HMT cDNA is selected from the group consisting of a single nucleotide sequence and a single nucleotide sequence. As a result, there is 1 part of the Kookōna HMT gene, and more than 5 parts of the Kookōna HMT gene, with a total length of more than 10.4kb. 3. The sequence of HMT cDNA was determined by the sequence of HMT cDNA. The analysis of HMT and the detection of HMT in the kidney are confirmed. The FISH method is used to determine the position of the HMT gene. HMT inhibitor is enhanced due to the reduction of HMT inhibitor, and HMT inhibitor is not affected due to the reduction of HMT inhibitor. 4. Inactivated enzymes and acidifying enzymes are refined in the small intestine and antibodies are produced. The antibody is used to detect the enzyme activity in the tissues of various mammalian species.