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遺伝的代謝疾患や癌の遺伝子治療のための新しい遺伝子導入・発現法の開発

开发新的基因导入和表达方法用于遗传代谢疾病和癌症的基因治疗

基本信息

批准号：
05670140
负责人：
中西真人
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は遺伝子治療の基礎技術のために次の2つの研究成果を上げることができた。1.遺伝子導入活性を持った膜融合リポソームの精製とその活性の定量化本年度は、センダイウイルスの膜融合活性を利用して高分子物質を細胞内に効率よく導入する方法を改良して、一枚膜の膜融合リポソームを調製しその活性を定量化することに成功した(中西・芦原・千田ら、論文投稿準備中)。精製した膜融合リポソームは、直径379nmの球状で、その最外部にウイルスのスパイクに類似した構造が存在することが、電子顕微鏡やレーザー光散乱装置を使った実験から明らかになった。これらリポソームはその70%以上が細胞膜と直接融合する能力を持っていた。さらにこの粒子に薬剤耐性遺伝子を封入しヒト培養細胞に導入すると、OD_<540>ユニットあたり4x10^5/mlの遺伝子導入活性を示し、遺伝子治療に必要とされる効率を満たしていることが明らかになった。2.センダイウイルス・ベクターの開発センダイウイルスを利用して細胞質で持続的に遺伝子を発現するシステムを作るために、持続感染の機構の解析とセンダイウイルスの遺伝子組み替えの研究を行った。まず温度感受性変異ウイルスの解析から、ウイルスのMタンパク質の量的異常が持続感染を引き起こすこと、この変異は遺伝子発現に影響を与えないことを明らかにした(近藤・中西ら、1993)。さらにワクチニアウイルスを使ってセンダイウイルスのNP、P、Lの各遺伝子を発現させた細胞に、ウイルスゲノムの両末端とホタル・ルシフェラーゼ遺伝子を結合させたマーカーRNAを導入してヌクレオキャップシド状の構造を作ることに成功し、さらにこの構造をセンダイウイルス感染細胞に導入することによりルシフェラーゼ遺伝子を発現させることに成功した(近藤・中西ら、投稿準備中)。これらはRNAウイルスを使った遺伝子発現ベクター開発の第一歩を達成した成果である。

For the second time this year, the results of the research on basic technology and technology have been reviewed. 1. The activity of this year's membrane fusion activity was quantified, and the membrane fusion activity was used to improve the method, a membrane fusion method was used to improve the method, and a membrane fusion was used to quantify the activity. The article is being prepared for submission). The precision film fuses the laser, the diameter 379nm is spherical, the outermost device is spherical, and the type of the device is similar to that of the microphone. The ability to directly fuse the cell membrane and maintain the ability of cell membrane fusion is much higher than that of 70%. In the case of particles, the tolerance of the cells was sealed, and the cells were introduced. The OD_<540> cells were loaded. The 4x10 ^ 5