造血系細胞における接着分子(VLA-4/VCAM-1)の機能に関する研究
造血细胞粘附分子(VLA-4/VCAM-1)功能研究
基本信息
- 批准号:05670299
- 负责人:
- 金额:$ 1.28万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
- 财政年份:1993
- 资助国家:日本
- 起止时间:1993 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
造血幹細胞の増殖と分化はストローマ細胞によって調節されている.この調節過程において接着分子VLA-4/VCAM-1の相互作用が重要であることがいくつかの実験系から示唆されている.我々は既に作製したマウスのVLA-4,VCAM-1に対するモノクローナル抗体を用いて,造血系におけるVLA-4/VCAM-1の発現とその機能を調べるとともに,マウスVCAM-1のcDNAクローニングを試み,以下の様な成果を得た.1.抗体によるFACS解析および免疫組織化学から,VLA-4は骨髄,脾臓,胸腺などの主要な造血組織の血液細胞に発現されており,特に幹細胞および前駆細胞に強く発現されている.一方,VCAM-1は血液細胞には発現されず,ストローマ細胞および血管内皮に特異的に発現されていることが分かった.2.VLA-4抗体の添加によりリンパ球系およびミエロイド系細胞の増殖が阻害されたが,VCAM-1抗体の添加ではT・Bリンパ球の分化のみが阻害された.従って,VLA-4は幹細胞が種々の造血系へと分化していく際に広範に機能しているが,VCAM-1はリンパ球系前駆細胞の分化過程においてストローマ細胞上で機能していることが示唆された.3.SRaプロモーターを用いた発現系を用いてマウスVCAM-1をコードするcDNAをクローニングすることに成功した.単離したcDNAは2種類(cMV6,cMV8)あり,それぞれ1.4kb,3.5kbのmRNAと対応する.抗体を用いた免疫沈降実験からマウスVCAM-1には107kDおよび42kDの2種類の蛋白が認められたが,COS細胞への遺伝子導入実験より,cMV6は42kD(S-VCAM)を,cMV8は107kD(L-VCAM)をコードしていることが分かった.得られたcDNAクローンの塩基配列から,L-VCAMは7個のlgドメインを持ち,ヒトVCAM-1と類似の構造を示すが,S-VCAMは4個のlgドメインをもつGPI結合型の分子であることが判明した.マウスにおける2種類のVCAM-1分子は単一の遺伝子のalternative splicingにより生じたものであることが強く示唆された.このGPI結合型のVCAM-1は他の動物種には認められず,マウスに特有なフォームであることも分かった.
Hematopoietic stem cell proliferation and differentiation is regulated by cell regulation. The interaction of VLA-4/VCAM-1 is important in this regulatory process. In order to modulate the function of VLA-4/VCAM-1 expression in hematopoietic lineage, VLA-4/VCAM-1 cDNA was tested and the following results were obtained: 1. FACS analysis of antibody and immunohistochemistry analysis of VLA-4 expression in hematopoietic lineage, spleen and thymus. Special stem cells and pre-mature cells are strongly developed. On the one hand,VCAM-1 is not found in blood cells, but in cells and vascular endothelium-specific cells. 2. The addition of VLA-4 antibody to VCAM-1 is not found in cells and vascular endothelium-specific cells. VLA-4 has been successfully used in the development of hematopoietic stem cells and in the differentiation of hematopoietic lineage cells. VCAM-1 has been successfully used in the development of hematopoietic lineage cells and in the differentiation of hematopoietic lineage cells. There are two kinds of cDNA (cMV6,cMV8), which are 1.4 kb, 3.5 kb and mRNA. The antibody was used in immunoprecipitation to detect two kinds of proteins of 107kD and 42kD in VCAM-1 and COS cells. cMV6 and 42kD(S-VCAM) were introduced into COS cells. cMV8 and 107kD(L-VCAM) were introduced into COS cells. L-VCAM has 7 different sites, VCAM-1 has similar structure and S-VCAM has 4 different sites. The two species of VCAM-1 molecule were cloned into the genome. This GPI binding type of VCAM-1 is unique to other animal species.
项目成果
期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Katayama,N.: "Stage-specific expression of c-kit protein by murine hematopoietic progenitors." Blood. 82. 2353-2360 (1993)
Katayama,N.:“小鼠造血祖细胞对 c-kit 蛋白的阶段特异性表达。”
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Ogawa,M.: "Expression and function of c-Kit in fetal hemopoietic progenitor cell:transition from the early c-Kit-independent to the late c-Kit-dependent wave of hemopoiesis in the murin embryo." Development. 117. 1089-1098 (1993)
Okawa,M.:“c-Kit 在胎儿造血祖细胞中的表达和功能:鼠胚胎造血从早期 c-Kit 独立型到晚期 c-Kit 依赖型的转变。”
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