ヒトH^+-ATP合成酵素subunit b遺伝子の発現制御に係る蛋白質因子の解析

人H^+-ATP合酶b亚基基因表达调控蛋白因子分析

基本信息

  • 批准号:
    05680555
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.34万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1993
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1993 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

subunit b遺伝子の構造は,部分的にしか決定していなかったが,今年度,再度subunit bの遺伝子を含んでいるクローンを単離し,全構造を決定した.その結果,ヒトsubunit bは,8つのExonにわかれてコードされていることが明らかとなった.ついで,昨年度明らかになっていたlstイントロン内エンハンサーについて,コンピューターによるホモロジーサーチを行ったところ,この27bps断片中には,Spl結合配列が1つ存在していた.そこで,次にこのSpl binding siteが本当に転写の増強に関与しているかを調べるために,塩基置換を行いmRNAの量をRPA法で測定した.その結果,Splの特にコアになる部分のmutantでは元の活性の3分の1の活性となり,その後半部分を変異させたものは約65%の活性,Spl結合部位を欠損させたもので約60%の活性が残っていた.従って,subunit bのlstイントロン内エンハンサーは,Splだけでなく,+160〜+170の塩基配列が関係していると結論された.次に,この部分の塩基配列に特異的に結合する核蛋白質の解析をゲル移動度シフト法により行った.プローブDNAとしては、subunit b遺伝子のlstエクソンとlstイントロンを含む172bpの断片をPCR法で合成し用いた.このラベルしたプローブDNAをHeLa cell 3SCから調製した核抽出蛋白質と反応させたところ,4本のバンドが観察された.つぎに結合の特異性を調べるため,プローブDNAと核抽出蛋白質と反応後,35bp断片(+149から+183)の非標識の二本鎖合成オリゴヌクレオチドを競合DNAとして加えたところ,これらの4本のバンドは消失した.従って,これら4本のバンドは,35bpの配列に核抽出液中の蛋白質が特異的かつ可逆的に結合したものと考えられ,これらの核蛋白質が,エンハンサーとして働いていることが強く示唆され,現在,non-binding mutations実験とそれらの蛋白質の単離精製を行っている.
Subunit

项目成果

期刊论文数量(12)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Higuti,T.,ら: "Molecular cloning and sequence of two cDNAs for human subunit c of H^+-ATP synthase in mitochondria." Biochim.Biophys.Acta.1173. 87-90 (1993)
Higuti,T.,等人:“线粒体中 H+-ATP 合酶的两个 cDNA 的分子克隆和序列。”Biochim.Biophys.Acta.1173(1993)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Higuti,T.,ら: "The Complete Amino Acid Sequence of Subunit d of Rat Liver Mitochondrial H^+-ATP Synthase." J.Biochem.114. 714-717 (1993)
Higuti, T., 等人:“大鼠肝脏线粒体 H^+-ATP 合酶 d 亚基的完整氨基酸序列。J.Biochem.114(1993)。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Higuti,T.,ら: "Molecular Cloning and Sequence of cDNAs for the Import Precursors of Oligomycin Sensitivity Conferring Protein,ATPase Inhibitor Protein,and Subunit c of H^+-ATP Synthase in Rat Mitochondria." Biochim.Biophys.Acta.1172. 311-314 (1993)
Higuti, T. 等人:“大鼠线粒体中寡霉素敏感性赋予蛋白、ATP 酶抑制剂蛋白和 H^+-ATP 合酶 c 亚基的 cDNA 分子克隆和序列。” .1172 .311-314 (1993)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Higuti,T.: "New Functionality Materials,Volume B:Synthesis and Function Control of Biofunctionality Materials" Elsevier Science Publishers B.V.Amsterdam, (1993)
Higuti,T.:“新功能材料,B 卷:生物功能材料的合成和功能控制”Elsevier Science Publishers B.V.Amsterdam,(1993)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Higuti,T.,ら: "Mitochondrial H^+-pumps as a molecular parallel condenser" Biochim.Biophys.Acta.(印刷中). (1994)
Higuti, T., et al.:“线粒体 H^+-泵作为分子平行冷凝器”Biochim.Biophys.Acta.(出版中)(1994 年)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
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作者:{{ showInfoDetail.author }}

知道了