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ATP合成酵素の分子構築における遺伝子制御の分子シンクロナイゼイション機構

ATP合酶分子构建中基因调控的分子同步机制

基本信息

批准号：
11167259
负责人：
樋口富彦
金额：
$ 2.43万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者らは,ATP合成酵素のサブユニットの転写レベルにおける制御システムを明らかにするため,Fo,stalkに属するサブユニット7種とF1のβ subunit,そして活性制御因子であるIF1(ATPase inhibitor protein)の全9種について転写物量の解析を行った.その結果,これら9種のサブユニットのmRNAは大部分心臓において最も多く発現しているが,これらmRNAの分子モル比は,脳・肝臓・心臓・腎臓の4種の臓器において全く同一の割合で発現されていることが初めて明かとなった.また,この発現パターンは,2〜90週齢ラットにおいても一定に保持されていることが明らかとなった.これらの結果から,ATP合成酵素サブユニットを一定の割合で発現するための,転写レベルでの分子シンクロナイゼイションシステム"ジーンシンクロナイザー"の存在が強く示唆された.さらに,本研究では,心筋細胞においてミトコンドリアが異常に増殖しているJVS(juvenile visceral steatosis)マウスを用いて,蛍光Differential Display(DD)法によりJVSマウスと正常マウスで発現しているmRNAの差を解析した.その結果,現段階でミトコンドリアの増殖に関与する可能性のある新規遺伝子を6種得ることに成功した.これらの因子がミトコンドリアにどのような影響を及ぼすかを調べるために,ミトコンドリア輸送ペプチドを融合させた蛍光タンパク発現ベクターを培養細胞中にトランスフェクトして,生細胞中におけるミトコンドリアの動態変化をタイムラプスデコンボリューションCCD蛍光顕微鏡下で直接観察する実験系を確立させた.現在,この実験系を用いてDD法によって得られた遺伝子の機能の解析を行なっている.

The applicant analyzed the contents of all 9 kinds of ATP synthase inhibitor IF1 (ATPase inhibitor protein), including 7 kinds of ATP synthase inhibitor F1 and β subunit Fo,stalk. The results showed that most of the 9 kinds of mRNA were found in the heart and most of them were found in the kidney. 2 ~ 90 weeks after the birth of the disease, the patient must be kept in the middle of the disease. As a result,ATP synthase activity was detected at a certain level, and the presence of ATP synthase was strongly indicated by the presence of ATP synthase. In this study, we analyzed the mRNA differences between JVS(juvenile visceral steatosis) and JVS(juvenile visceral steatosis) by using the method of Differential Display(DD). As a result, at the present stage, there are six kinds of new genes that have been successfully developed. The factors involved in this process are: (1) the concentration of protein,(2) the transfer of protein,(3) the fusion of protein,(4) the development of protein in cultured cells,(5) the dynamic transformation of protein in cultured cells,(6) the direct detection of protein under CCD microscope,(7) the establishment of a system for the detection of protein under microscope. Now, this system uses the DD method to analyze the function of the gene.