ヒトH±ATP合成酵素のsubunitb遺伝子の発現制御機作

人H±ATP合酶亚基b基因的表达调控机制

• 批准号: 04680196
• 负责人: 樋口 富彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04680196/
• 关键词: ATP合成酵素; subunit b; 遺伝子; 転写制御; シス-要素; トランス作働性因子; ミトコンドリア

本研究では,ヒト癌細胞であるHela細胞を用いてCATassayを行い,ヒトのH^+‐ATP合成酵素のsubunit b遺伝子の第1イントロン内に約16倍もの転写活性を促進するエンハンサーが存在することが明らかとなった.なお,第1イントロンを解析する場合は,subunit b遺伝子の開始コドンとCAT遺伝子の開始コドンの2つが存在することから,フレームシフト等の問題が生じる可能性が考えられたのでmRNAの発現量を直接比較することが出来るRibonuclease protection assay(RPA)法を用いた.ついで,この高い転写活性を持つエンハンサーは,本遺伝子の+160〜+186までの27bpに存在することが明らかとなった.そのエンハンサーは,Sp1タンパク質が結合する配列と100%のホモロジーを示したので,次に部位特異変異体を導入した遺伝子を用いてRPA法を行ったところ,いずれの遺伝子においても転写活性が減少した.特に,Sp1タンパク質が結合すると予測した変異体においては,転写の活性が低下した.さらに,その部位への蛋白質の結合をゲルシフト法によって確認したところ,3〜4種の核抽出蛋白質が第1イントロン内のエンハンサーに結合することが確かめられた.次にsubunit b遺伝子の5'上流領域について解析したところ,-1.3kbp-466bpの間に強力なサイレンサーエレメントが存在すること,そしてGCboxが転写に関係していることが明らかとなった.現在,当研究室では,ヒトのH^+-ATP合成酵素のFoサブユニットの1つであるsubunit c遺伝子(2種)の解析も行っており,subuni b遺伝子の上流領域のついての解析との比較検討とin vitro転写系の開発により,ミトコンドリアの形態形成に関わる核遺伝子の制御システムが解明されるものと期待される.

This study で は, ヒ ト cancer で あ る Hela を with い て CATassay を い, ヒ ト の H ^ + ‐ ATP synthetase の subunit 1 b posthumous son 伝 の イ ン ト ロ ン に within about 16 times も の planning write activity を promote す る エ ン ハ ン サ ー が exist す る こ と が Ming ら か と な っ た. な お, 1 イ ン ト ロ ン を parsing す は る situations, subunit B heritage 伝 の started コ ド ン と CAT heritage 伝 の started コ ド ン の 2 つ が exist す る こ と か ら, フ レ ー ム シ フ ト の problems such as が raw じ る possibility が exam え ら れ た の で mRNA の 発 now amount to directly compare す を る こ と が out る Ribonuclease protection Assay method (RPA) を with い た. つ い で, こ の high い planning write activity を hold つ エ ン ハ ン サ ー は, this legacy 伝 son の + 160 ~ + 186 ま で の 27 bp に exist す る こ と が Ming ら か と な っ た. そ の エ ン ハ ン サ ー は, Sp1 タ ン パ ク qualitative が combining す る match column と 100% の ホ モ ロ ジ ー を shown し た の で, times に site specific - variant を import し た posthumous son 伝 を with い て RPA line method を っ た と こ ろ, い ず れ の heritage 伝 son に お い て も planning write activity が reduces し た. に, Sp1 タ ン パ ク qualitative が combining す る と be し た - variant に お い て は, planning to write の active low が し た. さ ら に, そ の parts へ の protein の combining を ゲ ル シ フ ト method に よ っ て confirm し た と こ ろ, 3 ~ 4 kinds of の nuclear protein extraction が 1 イ ン ト ロ ン within の エ ン ハ ン サ ー に combining す る こ と が か indeed め ら れ た. Time に subunit b heritage 伝 son の 5 'upstream areas に つ い て parsing し た と こ ろ, between 1.3 KBP - 466 bp の に powerful な サ イ レ ン サ ー エ レ メ ン ト が exist す る こ と, そ し て GCbox が planning write に masato is し て い る こ と が Ming ら か と な っ た. Now, when the laboratory で は, ヒ ト の H ^ + - ATP synthetase の Fo サ ブ ユ ニ ッ ト の 1 つ で あ る subunit c heritage 伝 son (2) line analytical も の っ て お り, traces of subuni b 伝 son の upper field の つ い て の parsing と の beg と 検 in Vitro planning to write started の 発 に よ り, ミ ト コ ン ド リ ア の morphogenetic に masato わ る nuclear legacy 伝 son の suppression シ ス テ ム が interpret さ れ る も の と expect さ れ る.

项目成果

Higuti,T., 他: "Molecular cloning and sequence of cDNAs for the import precursors of oligomycin sensitivity conferring protein,ATP ase inhibitor protein,and subunitc of H^+‐ATP synthase in rat mitochondria." Biochim.Biophys.Acta. (1993)

Higuti, T. 等人：“大鼠线粒体中寡霉素敏感性赋予蛋白、ATP 酶抑制剂蛋白和 H^+-ATP 合酶亚基的输入前体的 cDNA 分子克隆和序列。” 1993）

樋口 富彦(分担): "エネルギー変換システム「生体超分子システム--生命理解のかなめ--」猪飼 篤,樋口 富彦,吉村 哲郎,田中 啓二編蛋白質核酸酵素増刊号" 共立出版, (1993)

樋口富彦（撰稿人）：“能量转换系统‘生物超分子系统--理解生命的关键--’Atsushi Ikai、Tomihiko Higuchi、Tetsuro Yoshimura、Keiji Tanaka 编。蛋白质、核酸、酶特刊”Kyoritsu Shuppan， (1993)

Higuti,T., 他: "The Complete Amino Acid Sequence of Subunit e of Rat Liver Mitochondrial H^+‐ATP Synthase." Biochemistry. 31. 12451-12454 (1992)

Higuti, T., et al.：“大鼠肝脏线粒体 H^+-ATP 合成酶亚基的完整氨基酸序列。”31. 12451-12454 (1992)

Inoue,I., 他: "An ATP‐sensitive K^+ channel in the membrane of fused giant mitoplast." J.Physiol.446. 130 (1992)

Inoue, I., et al.：“融合巨线粒体膜中的 ATP 敏感 K^+ 通道。”J.Physiol.446 (1992)。

Higuti,T.: "Function of Mitochondrial H^+_-Pumps as a Molecular Parallel Condenser.In:New Functionality Materials:Design,Preparation and Control(Tsuruta,T Seno,M.,and Doyama,M.eds.)" Elsevier Science Publishers B.V., (1993)

Higuti,T.：“线粒体 H^ _-泵作为分子平行冷凝器的功能。见：新功能材料：设计、制备和控制（Tsuruta，T Seno，M. 和 Doyama，M.eds.）” Elsevier