ミトコンドリア増生の分子シンクロナイゼイションと新規蛋白質因子の解析

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PCR-Select SubtractionによりJVSマウス及び対照マウス(c57BL/6J)の心臓間でmRNA発現量に差のある遺伝子を1186clone単離した.発現量の差が特に大きかった,56cloneについてシークエンスを行い,BLASTによりホモロジー検索を行った.その結果,23cloneが既知の遺伝子,15cloneが未知の遺伝子であった.今回のシークエンス結果から,JVSマウスの心臓においてup-regulateしている遺伝子にはribosomal proteinやストレス応答因子が多く含まれていることが分かった.このことから,JVSマウスでは,カルニチン欠乏により脂肪酸代謝障害が起きており,これが刺激(ストレス)となってこれらの遺伝子が増加したとも考えられる.これらはJVSマウスの心臓におけるミトコンドリアの増生(ミトコンドリアタンパク質の増加)にも関っている可能性があり,大変興味深い.JVSマウス心筋で対称マウスに比し差の見られた遺伝子(III,IV,V,VIII)及びp53(コントロール実験のための遺伝子)のシークエンスから21bpの配列を順配列→hairpin部分→逆配列からなるsiRNAを設計作製した.これらの二本鎖DNAをpSilencer 1.0-U6 siRNA Expression Vector(3292bp; Ambion,#7207)に組み込み,C2C12へトランスフェクションした.その結果,ミトコンドリアの凝集に関わるもの,核や細胞の大きさを顕著に増大させるものなど,興味深い実験結果が得られており,今後詳細に検討する必要がある.